Lëpa me pepton mishi thahet. Pepton agar i mishit të mediave të thjeshta të kulturës

** Përbërja është verifikuar dhe rregulluar për të përmbushur parametrat e kërkuar

Përgatitja:

Përzieni 50.0 g pluhur në 1000 ml ujë të distiluar. Ziejeni për të tretur plotësisht grimcat. Sterilizoni me autoklavim në 1,1 atm (121°C) për 15 minuta.

Parimi dhe vlerësimi i rezultatit:

Shumë baktere rriten me bollëk në këtë mjedis. Rekomandohet për marrjen e sasive të mëdha të masës mikrobike gjatë prodhimit të një vaksine ose toksine.

Ky medium është i ngjashëm në përbërje me Meat Extract Medium (ATCC Medium 225). Tretja peptike e indeve shtazore dhe infuzioni i viçit sigurojnë praninë në mjedis të azotit, squfurit, vitaminave dhe substancave të tjera të nevojshme për rritjen e bollshme të mikroorganizmave. Kloruri i natriumit siguron izotonitetin e mjedisit.

Kontrolli i cilësisë:

Pamja e pluhurit:

Pluhur homogjen i verdhë me rrjedhje të lirë.

Dendësia e mediumit të përfunduar:

Formohet një medium që korrespondon në densitet me një xhel agar 2,5%.

Ngjyra dhe transparenca e mediumit të përfunduar:

Mediumi është me ngjyrë të verdhë, transparent ose pak opalescent nëse në enët Petri krijohet xhel.

Aciditeti i mjedisit:

Në 25°C, tretësira ujore (5.0% w/v) ka një pH prej 7.5 ± 0.2.

Pronat kulturore:

Karakteristikat e rritjes së shtameve referente pas 18-48 orësh në 35°C.

Llojet e mikroorganizmave (ATSS)	Lartësia

Mjete të thjeshta ushqyese Lëngu i mishit me pepton (MPB) është baza proteinike e të gjitha mediave. Përgatitet në ujin e mishit me shtimin e peptonit të gatshëm. Peptoni është një produkt i tretjes jo të plotë (hidrolizës) të proteinave, i përdorur si burim i azotit dhe karbonit. Mish-pepton agar (MPA) - përftohet duke shtuar 1,5 - 3% a g ap - a g apa në MPB. Agar-agar është një produkt alga deti që përmban polisakaride me peshë të lartë molekulare

Mjetet ushqyese selektive stimulojnë rritjen e disa mikrobeve dhe pengojnë rritjen e të tjerëve (duke shtuar përbërës të caktuar në mjedis). Për shkak se bakteret patogjene shumohen dhe grumbullohen në këto mjedise, ato quhen edhe mjedise pasurimi. Për shembull, mediumi i Müller-it shërben për akumulimin e salmonelës. Shkumës, tretësira e Lugolit dhe hiposulfiti i natriumit shtohen në mjedisin ushqyes. Kur këto substanca ndërveprojnë, formohet tetrationati i natriumit, i cili pengon rritjen e E. coli, por krijon kushte të favorshme për përhapjen e salmonelës.

Mjetet diagnostike diferenciale bëjnë të mundur dallimin e një lloji mikrobi nga një tjetër bazuar në aktivitetin e ndryshëm biokimik të baktereve. Përbërja e mjeteve diagnostikuese diferenciale përfshin: - lëndën ushqyese kryesore që siguron përhapjen e baktereve, - një substrat të caktuar kimik, një qëndrim i ndryshëm ndaj të cilit është një shenjë diagnostike, - një tregues, ndryshimi i ngjyrës së të cilit tregon zbërthimin e substrati dhe formimi i produkteve përfundimtare.

Endo medium Përbërja: agar ushqyes, laktozë, fuchsin bazë. Mediumi ka një nuancë rozë. Kolonitë e baktereve që fermentojnë laktozën duken të kuqe të errët; kolonitë e baktereve që nuk fermentojnë laktozën mbeten pa ngjyrë.

Mediumi Levin Përbërja: agar ushqyes, laktozë, eozinë dhe blu metilen. Mediumi ka një nuancë kafe. Kolonitë e baktereve që fermentojnë laktozën duken blu të errët; kolonitë e baktereve që nuk fermentojnë laktozën mbeten pa ngjyrë.

Mediumi i Ploskirev Përbërësit: agar ushqyes, laktozë, e kuqe neutrale, kripëra biliare, jeshile shkëlqyese. Mediumi ka një nuancë rozë-verdhë. Kolonitë e baktereve fermentuese të laktozës janë të kuqe lingon; kolonitë e baktereve që nuk fermentojnë laktozën mbeten pa ngjyrë.

Teknika e inokulimit Metoda Drigalski: Një pikë e materialit testues shtohet në enën e parë Petri dhe shpërndahet mbi sipërfaqen e mediumit me një shpatull sterile. Më pas me të njëjtën shpatull (pa djegur në flakën e djegies) bëhet e njëjta mbjellje në filxhanin e dytë dhe të tretë. Me çdo inokulim të baktereve, gjithnjë e më pak mbetet në shpatull dhe, kur mbillet në pjatën e tretë, bakteret do të shpërndahen mbi sipërfaqen e lëndës ushqyese veçmas nga njëra-tjetra dhe do të formohen koloni të izoluara. Mbjellja me një lak në goditje paralele

Mbjellja me një lak në goditje paralele Një koloni është një grup i dukshëm i izoluar i përfaqësuesve të një lloji mikroorganizmi, i formuar kur një qelizë bakteriale shumëzohet në një mjedis të dendur ushqyes. Kolonitë e baktereve të llojeve të ndryshme ndryshojnë nga njëra-tjetra në karakteristikat kulturore.

GOST 20730-75

Grupi P35

STANDARD SHTETËROR TË BASHKIMIT TË BRSS

Lëndët ushqyese

LËNGA MISH-PEPTON (PER QËLLIMET VETERINARE)

Specifikimet

Media ushqyese. Supë mishi-pepton (për veterinare). Specifikimet *

______________
*Emri i standardit. Botim i ndryshuar, Rev. N 1.

Me Rezolutën e Komitetit Shtetëror të Standardeve të Këshillit të Ministrave të BRSS të datës 9 Prill 1975 N 899, periudha e vlefshmërisë u vendos nga 01/01/1976 deri më 01/01/1981 *
________________
* Periudha e vlefshmërisë u hoq sipas Protokollit Nr. 4-93 të Këshillit Ndërshtetëror për Standardizimin, Metrologjinë dhe Certifikimin (IUS Nr. 4, 1994). - Shënim i prodhuesit të bazës së të dhënave.

RISHIM. gusht 1975

I NDRYSHUAR Ndryshimi nr. 1, miratuar dhe vënë në fuqi më 01/01/90 me Dekretin e Standardit Shtetëror të BRSS të 28/06/89 N 2194

Ndryshimi nr. 1 është bërë nga prodhuesi i bazës së të dhënave sipas tekstit të IUS Nr. 11, 1989

Ky standard vlen për lëngun e mishit-peptonit, i cili është një zgjidhje ushqyese e destinuar për kultivimin e mikroorganizmave.

1. KËRKESAT TEKNIKE

1.1. Lëngu i peptonit të mishit duhet të prodhohet në përputhje me rregullat aktuale teknologjike nga uji i mishit në përputhje me GOST 20729-75 me shtimin e 1% pepton dhe 0,5% klorur natriumi në hollime 1:1, 1:2 dhe 1:4.

1.2. Lëngu i mishit-pepton për sa i përket treguesve fiziko-kimikë, biokimikë dhe biologjikë duhet të jetë në përputhje me kërkesat dhe standardet e specifikuara në Tabelën 1.

Tabela 1


Emri i treguesit	Norma për hollimet

Pamja e jashtme	Lëng i pastër
	E verdhe	E verdhe e lehte
	Ekstrakt specifik i mishit të freskët dhe pepton
Prania e papastërtive mekanike, myku, thekon dhe sedimenti	Nuk lejohet
Pjesa masive e azotit total, %, jo më pak
Pjesa masive e azotit, amino grupet, aminoacidet dhe peptidet më të ulëta, %, jo më pak
Pjesa masive e peptoneve, %, jo më pak
Pjesa masive e lëndës së thatë, %, jo më pak
Pjesa masive e proteinave, %, jo më shumë
Pjesa masive e klorurit të natriumit, %
Përqendrimi i joneve të hidrogjenit (pH)
Steriliteti	Mbjellja në mjedise ushqyese nuk duhet të shkaktojë rritje të mikroflorës për 3 ditë në një termostat në 37-38 ° C
Aftësia për të mbështetur rritjen e mikrobeve, densitetin optik, jo më pak, për
Staphylococcus aureus "Lossmanov"			Lartësia është tipike
Shtam Escherichia coli 675
Shtapi i Streptococcus faecalis 6783

1.1, 1.2. (Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

2. RREGULLAT E PRANIMIT

2.1. Lënga e mishit-pepton jepet dhe merret në tufa.

2.2. Çdo grumbull i supës së mishit-peptonit në ndërmarrjet e industrisë biologjike të Ministrisë së Bujqësisë së BRSS duhet të pranohet nga kontrollori shtetëror i Institutit Shtetëror të Kontrollit Shkencor të Gjithë Bashkimit të Përgatitjeve Veterinare të Ministrisë së Bujqësisë së BRSS.

2.3. Një seri duhet të kuptohet si çdo sasi lëng mishi-pepton të prodhuar në një cikël teknologjik, në një enë (reaktor) dhe të dokumentuar në një dokument cilësor.

2.4. Për të kontrolluar cilësinë e ilaçit, merren 2 litra nga secila grumbull i supës së mishit-pepton prej më shumë se 50 litra, dhe 0,6 litra për një vëllim më të vogël se 50 litra.

Nëse e gjithë seria e lëngut të mishit-pepton është e paketuar në shishe, bëni një mostër në sasinë e një shisheje. Nëse supa e mishit-peptonit është e paketuar në shishe, bëni një përzgjedhje të një numri të tillë shishesh që vëllimi i lëngut të mishit-peptonit në shishet e zgjedhura të korrespondojë me normën e mësipërme, e cila përcaktohet në varësi të vëllimit të përgjithshëm të serisë. me lëng mishi-pepton.

2.5. Nëse merren rezultate të pakënaqshme të testit për të paktën një nga treguesit, një seri lëngjesh mishi-pepton konsiderohet se nuk përputhet me kërkesat e këtij standardi.

2.6. Testimi i kontrollit të mostrave me kërkesë të konsumatorit kryhet nga Instituti Shtetëror Shkencor dhe Kontrolli i Barnave Veterinare Gjithë Bashkimi i Ministrisë së Bujqësisë së BRSS.

3. METODAT E PROVIMIT

3.1. Metodat e kampionimit

3.1.1. Një mostër e supës së mishit-peptonit në sasi prej 2 ose 0,6 litrash (në varësi të vëllimit të grupit të barit) merret nga reaktori ose shishja në mënyrë sterile.

Një kampion prej 2 litrash paketohet në 10 shishe 200 cm.Pesë shishe përdoren për analizë dhe pesë janë lënë në arkivin e kontrollorit shtetëror.

Një mostër e marrë nga një grumbull lëngu mishi-pepton me një vëllim më të vogël se 50 litra nuk është lënë në arkiv.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.2. Pamja, ngjyra, prania e papastërtive mekanike, myku, thekon dhe sedimenti përcaktohen duke parë shishet dhe shishet me lëng mishi-pepton në dritën e transmetuar, për të cilën shishet tunden, duke i kthyer kapakët poshtë dhe shishet tunden.

3.3. Era e lëngut të mishit-peptonit përcaktohet organoleptikisht në mostër.

3.4. Përcaktimi i përmbajtjes totale të azotit

3.4.1. Pajisjet dhe reagentët

bilancet analitike;

Balonë Kjeldahl me kapacitet 50-100 cm sipas GOST 25336-82;

aparat mikro-Kjeldahl;

element ngrohje (sobë, djegës);

pipeta në 1, 2, 5 cm sipas GOST 20292-74;

biretat sipas GOST 20292-74;

ujë i distiluar sipas GOST 6709-72;

acid sulfurik sipas GOST 4204-77, i koncentruar dhe zgjidhje 0.1 N;

hidrat oksid natriumi sipas GOST 4328-77, solucione 30-33% dhe 0,1 N të përgatitura në ujë të distiluar të zier paraprakisht;

peroksid hidrogjeni sipas GOST 10929-76;

e kuqe metil;

blu metilen;

alkool etilik i korrigjuar sipas GOST 5962-67;

metil portokalli, tretësirë 0.1%.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.4.2. Kryerja e testit

Lëngu i mishit-pepton në sasi prej 1 cm vendoset në një enë Kjeldahl dhe shtohet 2 cm acid sulfurik i koncentruar. Një shishe qelqi në formë dardhe ose një gyp i vogël me majë të mbyllur futet në qafën e balonës dhe kampioni mineralizohet, fillimisht në zjarr të ulët, pastaj rritet shkalla e ngrohjes, duke mos lejuar që përzierja e vluar të hidhet në pjesë e ngushtë e balonës. Mineralizimi kryhet në prani të një katalizatori - peroksid hidrogjeni. Katalizatori shtohet pas fillimit të zierjes, 0,5 cm çdo 15-20 minuta derisa tretësira të zbardhet plotësisht.

Pas ftohjes, përmbajtja e balonës kalohet në një enë distilimi, duke shtuar 10-12 cm ujë të distiluar. Plotësia e transferimit kontrollohet duke përdorur treguesin metil portokalli. Pjesa e fundit e ujit të shpëlarë duhet të mbetet e verdhë.

20 cm tretësirë të acidit sulfurik 0,1 N dhe 2 pika tregues Tashiro hidhen në balonën marrëse të aparatit Kjeldahl. Treguesi Tashiro përgatitet duke tretur 0,4 g të kuqe metil dhe 0,2 g blu metilen në 200 cm alkool etilik 96%.

Balona e zhveshjes është e lidhur me një frigorifer dhe një gjenerator avulli. Përmbajtja e balonës së distilimit neutralizohet me një zgjidhje 30-33% të hidroksidit të natriumit duke përdorur një tregues metil portokalli. Distilimi kryhet derisa të mblidhen rreth 70 cm tretësirë në balonën marrëse.

Përmbajtja e balonës marrëse titrohet me një tretësirë 0,1 N të hidroksidit të natriumit derisa ngjyra e tretësirës të ndryshojë nga vjollcë në jeshile.

Në të njëjtën kohë, mbi reagentët kryhet një eksperiment kontrolli, për të cilin në vend të lëngut mish-pepton, futet në balonë për mineralizim 1 cm ujë të distiluar.

3.4.3. Përpunimi i rezultateve

Përmbajtja e azotit total në lëngun e mishit-pepton () si përqindje llogaritet duke përdorur formulën

ku është sasia e tretësirës së acidit sulfurik 0,1 N të derdhur në balonën marrëse, cm;

- faktori korrigjues në titrin e acidit sulfurik 0,1 N;

- sasia e tretësirës së hidroksidit të natriumit 0,1 N e përdorur për titrimin e kampionit të provës, ose në eksperimentin e kontrollit, cm;

- sasia e lëngut të mishit-peptonit të marrë për analizë, cm;

0,0014 - sasia e azotit që korrespondon me 1 cm tretësirë të acidit sulfurik 0,1 N, g.

Rezultati përfundimtar i testit merret si ndryshimi midis mesatareve aritmetike të dy përcaktimeve paralele në mostrat eksperimentale dhe ato të kontrollit. Dallimet e lejuara ndërmjet rezultateve të dy përcaktimeve paralele nuk duhet të kalojnë ±0,5%.

3.4.2, 3.4.3. (Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.5. Përcaktimi i përmbajtjes së azotit të amino grupeve të aminoacideve dhe peptideve të ulëta

3.5.1. Pajisjet, materialet dhe reagentët

Për të kryer testin përdorni:

pH metër;

gota laboratorike sipas GOST 25336-82;

pipeta, byreta sipas GOST 20292-74;

formalinë teknike sipas GOST 1625-75;

hidrat oksid natriumi sipas GOST 4328-77, zgjidhje 0.1 N;

fenolftaleinë, tretësirë alkooli 1%;

ujë i distiluar sipas GOST 6709-72.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.5.2. Përgatitja për testin

Menjëherë para analizës, përgatitet një përzierje e formolit. Për ta bërë këtë, shtoni 1 cm zgjidhje 1% fenolftaleinë në 50 cm formalinë dhe sillni përzierjen në një ngjyrë pak rozë me një zgjidhje 0,1 N të hidroksidit të natriumit.

3.5.3. Kryerja e testit

Shtoni 18 cm ujë të distiluar në 2 cm lëng mishi-pepton dhe rregulloni pH-në e përzierjes në 7.0 me një tretësirë 0.1 N të hidroksidit të natriumit. Më pas shtoni 2 cm të përzierjes së formolit dhe, me përzierje të vazhdueshme, titroni në mënyrë potenciometrike me një tretësirë 0,1 N të hidroksidit të natriumit në pH 9,2.

Në të njëjtën kohë, mbi reagentët kryhet një eksperiment kontrolli, për të cilin në vend të 2 cm lëng mishi-pepton, merret 2 cm ujë i distiluar.

3.5.4. Përpunimi i rezultateve

Përmbajtja e azotit të amino grupeve të aminoacideve dhe peptideve më të ulëta në lëngun e mishit-pepton () në përqindje llogaritet duke përdorur formulën

ku është sasia e tretësirës së hidroksidit të natriumit 0,1 N e përdorur për titrimin e kampionit të provës, cm;

- sasia e tretësirës së hidroksidit të natriumit 0,1 N e përdorur për titrim në eksperimentin e kontrollit, cm;

- faktori korrigjues në titrin e tretësirës 0,1 N të hidroksidit të natriumit;

0,0014 - sasia e azotit që korrespondon me 1 cm zgjidhje 0,1 N të hidroksidit të natriumit, g;

2 - sasia e supës së mishit-peptonit të marrë për analizë, shih.

Mesatarja aritmetike e rezultateve të dy përcaktimeve paralele merret si rezultat përfundimtar i provës. Diferencat e lejuara ndërmjet rezultateve të përcaktimeve paralele nuk duhet të kalojnë ±0,2%.

3.5.2-3.5.4. (Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.6. Përcaktimi i përmbajtjes së peptonit

3.6.1. Pajisjet, materialet dhe reagentët

Për të kryer testin përdorni:

kolorimetër fotoelektrik ose spektrofotometër;

pipeta sipas GOST 20292-74;

tuba provë sipas GOST 25336-82;

hidrat oksid natriumi sipas GOST 4328-77, zgjidhje 10%;

sulfat bakri sipas GOST 4165-78, zgjidhje 2%;

ujë i distiluar sipas GOST 6709-72;

centrifugat desktop të tipit OPN-8-14.2.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.6.2. Përgatitja për testin

3.6.2.1. Kur ndërtohet një grafik kalibrimi, përqendrimi i peptonit të vërtetë vizatohet si përqindje përgjatë boshtit të abshisës dhe densiteti optik () vizatohet përgjatë boshtit të ordinatave sipas të dhënave të dhëna në Tabelën 2.

tabela 2


Përqendrimi i peptonit të vërtetë, %	Dendësia optike,

3.6.3. Kryerja e testit

10 cm lëng mishi-pepton në një hollim 1:10 derdhet në një provëz dhe shtohet 1 cm zgjidhje 10% e hidroksidit të natriumit dhe një zgjidhje 2% e sulfatit të bakrit. Përzierja tundet mirë pasi shtohet çdo reagent.

Në të njëjtën kohë, kryhet një eksperiment kontrolli për reagentët, për të cilët, në vend të 10 cm lëng mishi-pepton të holluar, merret 10 cm ujë i distiluar.

Pas 2 minutash, përzierja centrifugohet për 10 minuta me një shpejtësi rrotullimi 3000-4000. Intensiteti i ngjyrës matet duke përdorur një fotoelektrokolorimetër në një gjatësi vale 540-560 nm ose një spektrofotometër në 540 nm në kuveta me gjatësi pune 10 mm.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.6.4. Përpunimi i rezultateve

Përqendrimi i peptonit të vërtetë në lëngun e mishit-pepton përcaktohet duke përdorur një kurbë kalibrimi.

Dendësia optike () e supës së mishit-peptonit është e barabartë me ndryshimin në densitet optike në eksperimentin me kampionin e provës dhe në eksperimentin e kontrollit. Përqendrimi i peptonit të vërtetë të marrë nga grafiku shumëzohet me 10 (d.m.th., me hollimin e lëngut të mishit-peptonit).

Mesatarja aritmetike e rezultateve të dy përcaktimeve paralele merret si rezultat përfundimtar i provës. Diferencat e lejuara ndërmjet rezultateve të përcaktimeve paralele nuk duhet të kalojnë ±5%.

3.7. Përcaktimi i përmbajtjes së lëndës së thatë

3.7.1. Pajisjet

Për të kryer testin përdorni:

bilancet analitike;

kabinet tharjeje laboratori;

tharëse sipas GOST 25336-82;

gota për peshimin (bulks) në përputhje me GOST 25336-82;

pipeta sipas GOST 20292-74.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.7.2. Kryerja e testit

Shishja e peshimit, e tharë më parë në peshë konstante, peshohet me një gabim jo më shumë se 0,0002 g lëng mishi-pepton në masën 1,0-1,2 g. Më pas shishja me lëng mishi-peptone thahet në furrë në temperaturë prej 100-105°C deri në masë konstante. Tharja vazhdon derisa diferenca midis dy peshimeve të mëpasshme të jetë jo më shumë se 0,0002 g.

Shënim. Rritja e masës gjatë njërit prej peshimeve gjatë procesit të tharjes nuk merret parasysh në llogaritje.

3.7.3. Përpunimi i rezultateve

Përmbajtja e lëndës së thatë në lëngun e mishit-pepton () si përqindje llogaritet duke përdorur formulën

ku është masa e një shishe boshe me kapak, g;

- pesha e shishes me kapak dhe me lëng mishi-pepton para tharjes, g;

- pesha e shishes me kapak dhe me lëng mishi-pepton pas tharjes, g;

Mesatarja aritmetike e rezultateve të dy përcaktimeve paralele merret si rezultat përfundimtar i provës. Diferencat e lejuara ndërmjet rezultateve të përcaktimeve paralele nuk duhet të kalojnë 0.2%.

3.8. Përcaktimi i përmbajtjes së proteinave (sipas metodës Lowry)

3.8.1. Pajisjet dhe reagentët

Për të kryer testin përdorni:

kolorimetër fotoelektrik;

tuba provë xhami sipas GOST 25336-82;

pipeta sipas GOST 20292-74;

filtra letre;

hidrat oksid natriumi sipas GOST 4328-77, 0.1 n. zgjidhje;

karbonat natriumi sipas GOST 84-76;

tartrati i natriumit ose tartrati i kaliumit i dyzëvendësuar, tretësirë 1%;

sulfat bakri sipas GOST 4165-78;

tungstik natriumi sipas GOST 18289-78;

molibdat natriumi sipas GOST 10931-74;

acid ortofosforik 85%;

acid klorhidrik sipas GOST 3118-67 *;
________________
* GOST 3118-77 është në fuqi në territorin e Federatës Ruse. - Shënim i prodhuesit të bazës së të dhënave.

sulfat litium;

brom sipas GOST 4109-79;

ujë i distiluar sipas GOST 6709-72.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.8.2. Përgatitja për testin

Përgatitja e reagentit A

Një mostër e karbonatit të natriumit me peshë 2 g, e peshuar me një gabim jo më shumë se 0,02 g, shpërndahet në 100 cm prej 0,1 N. tretësirë e hidroksidit të natriumit. Nëse tretësira është e turbullt, atëherë ajo duhet të filtrohet para përcaktimit.

Përgatitja e reagentit B

Një mostër e sulfatit të bakrit me peshë 0,5 g, e peshuar me një gabim jo më shumë se 0,02 g, shpërndahet në 100 cm të një tretësire 1% të tartratit të natriumit ose kaliumit të dyfishtë. Nëse tretësira është e turbullt, atëherë ajo duhet të filtrohet para përcaktimit.

Përgatitja e reagentit C

Reagenti C përgatitet menjëherë para përcaktimit duke përzier 50 pjesë të reagentit A dhe 1 pjesë të reagentit B.

Përgatitja e reagentit D

Reagenti D (reagenti i Folinit) përgatitet në një balonë qelqi rezistente ndaj zjarrit me fund të rrumbullakët 1 L me kondensator refluks.

Në balonë vendosen 100 g acid tungstik natriumi, 25 g molibdat natriumi dhe 700 ml ujë të distiluar. Pasi kripërat janë tretur plotësisht, në balonë shtohen 50 cm acid ortofosforik 85% dhe 100 cm acid klorhidrik i koncentruar. Përmbajtja e balonës përzihet me kujdes, por mirë. Me balonën lidhet një kondensator refluks dhe përzierja zihet (jo shumë) për 10 orë.Zilimi mund të kryhet me ndërprerje, por merret parasysh vetëm periudha e vlimit.

Pas zierjes, përzierjes i shtoni 150 g sulfat litium, 50 cm ujë të distiluar dhe 5 pika brom (me kujdes). Për të hequr bromin e tepërt, tretësira zihet për 15 minuta pa frigorifer nën rrymë. Pas ftohjes, tretësira e përfunduar sillet në 1 litër në një balonë vëllimore, filtrohet përmes një filtri letre dhe ruhet në një shishe të errët me një tapë të bluar në një vend të errët. Reagenti D duhet të jetë me ngjyrë të verdhë kashte pa nuancë të gjelbër, më pas përcaktohet përqendrimi i acidit në reagent. Për ta bërë këtë, reagjenti i përgatitur hollohet me ujë të distiluar 1:10 (1 cm reagent dhe 9 cm ujë) dhe titrohet me një zgjidhje 0.1 N të hidroksidit të natriumit kundër fenolftaleinës (3-4 pika). Aciditeti llogaritet duke pjesëtuar numrin e mililitrave prej 0,1 N. e alkalit që përdoret për të titruar 1 cm të reagentit D me 10. Reagjenti D ka një aciditet 1,6-2,3 N.

Përgatitja e reagentit E

Reagenti E është reagjenti D i holluar në 1 N. zgjidhje. Për shembull, nëse reagjenti D është një tretësirë acidi 2,3 N, atëherë për të përgatitur një tretësirë E 1 N duhet të merrni 10 cm reagjent D dhe 13 cm ujë të distiluar.

Ndërtimi i një grafiku kalibrues për përcaktimin e proteinave

Përgatiten një sërë tretësish me përmbajtje të caktuar proteinash me përqendrim në rënie nga 0,10 në 0,01%, me të cilat kryhet një reaksion ngjyre sipas pikës 3.8.3. Për të përgatitur solucione, mund të përdorni albuminë, miozinë dhe serum amtar. Përmbajtja e proteinave në tretësirë përcaktohet sipas Kjeldahl. Intensiteti i ngjyrës matet duke përdorur një fotoelektrokolorimetër kundrejt ujit. Dendësia optike e kontrollit për reagentët zbritet nga dendësia optike e tretësirave të proteinave dhe vlera që rezulton vihet në grafik përgjatë ordinatës. Boshti i abshisave tregon përqendrimin e proteinave në tretësirë (në përqindje ose miligram).

Hollimi i kampionit të provës për vendosjen e një reaksioni me ngjyra zgjidhet në mënyrë të tillë që numri kryesor i matjeve për sa i përket densitetit optik të jetë në intervalin 0,2-0,8, ku saktësia e matjes është më e larta.

3.8.3. Kryerja e testit

1 cm lëng mishi-pepton i holluar 1:10 hidhet në epruvetë, shtohet 5 cm reagjent C, përzihet dhe pas 10 minutash shtohet 0,5 cm reagjent E. Në të njëjtën kohë, një kontroll për reagentët. kryhet, për të cilin, në vend të lëngut mish-pepton, merret ujë 1 cm ujë i distiluar dhe shtohen të njëjtat reagentë si në epruvetën me lëng mishi-pepton. Masa përzihet mirë dhe vendoset në një vend të errët për 30-40 minuta.

Intensiteti i ngjyrës matet në një fotoelektrokolorimetër me një filtër të kuq (630-640 nm) kundrejt ujit në kuveta 5 mm. Nga vlerat e densitetit optik të mostrës së provës, zbritet vlera e densitetit optik të kontrollit për reagentët. Bazuar në vlerat e marra të densitetit optik të tretësirave, përmbajtja e proteinave në mostra përcaktohet duke përdorur një grafik kalibrimi. Gjatë llogaritjes së përmbajtjes së proteinave në një kampion, faktori i hollimit merret parasysh përpara se të kryhet një reaksion me ngjyra.

Mesatarja aritmetike e rezultateve të dy përcaktimeve paralele merret si rezultat përfundimtar i provës. Diferencat e lejuara ndërmjet rezultateve të përcaktimeve paralele nuk duhet të kalojnë ±0,05%.

3.8.2, 3.8.3. (Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.9. Përcaktimi i përmbajtjes së klorurit të natriumit

3.9.1. Pajisjet, materialet dhe reagentët

Për të kryer testin përdorni:

bilancet analitike;

element ngrohje (djegëse, sobë);

pipeta sipas GOST 20292-74;

biretat sipas GOST 20292-74;

gota laboratorike sipas GOST 25336-82;

shap amoniumi hekuri sipas GOST 4205-77, zgjidhje e ngopur;

tiocianat kaliumi sipas GOST 4139-75 ose tiocianat amonit, zgjidhje 0,1 N;

acid nitrik sipas GOST 4461-77, i koncentruar;

nitrat argjendi sipas GOST 1277-75, zgjidhje 0,1 N;

ujë i distiluar sipas GOST 6709-72.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.9.2. Kryerja e testit

Në një gotë vendosen 2 cm lëng mishi-pepton, shtohen 20 cm ujë, 1 cm acid nitrik i koncentruar dhe 10 cm 0,1 N. tretësirë e nitratit të argjendit.

Përzierja që rezulton nxehet derisa të fillojë të vlojë dhe ftohet shpejt duke e zhytur gotën në një enë me ujë në temperaturën e dhomës. Pas ftohjes, përzierjes i shtohet 2 cm tretësirë e ngopur e amonit hekur dhe titrohet me një tretësirë 0,1 N të tiocianatit të kaliumit (ose tiocianatit të amonit) derisa të shfaqet një ngjyrë rozë e verdhë.

3.9.3. Përpunimi i rezultateve

Përmbajtja e klorurit të natriumit në lëngun e mishit-pepton () si përqindje llogaritet duke përdorur formulën

ku është sasia e tretësirës 0,1 N të nitratit të argjendit të marrë në një gotë me një kampion, cm;

- faktori korrigjues ndaj titrit të solucionit të nitratit të argjendit 0,1 N;

- sasia e tretësirës 0,1 N të tiocianatit të kaliumit (ose tiocianatit të amonit) e përdorur për titrimin e kampionit të provës, cm;

- faktori korrigjues në titrin e tretësirës 0,1 N të tiocianatit të kaliumit (ose tiocianatit të amonit);

0,005844 - sasia e klorurit të natriumit që korrespondon me 1 cm zgjidhje 0,1 N të nitratit të argjendit;

- sasia e lëngut të mishit-peptonit të marrë për analizë, shih

Mesatarja aritmetike e rezultateve të dy përcaktimeve paralele merret si rezultat përfundimtar i provës. Diferencat e lejuara ndërmjet rezultateve të përcaktimeve paralele nuk duhet të kalojnë ±0,01%.

3.9.2, 3.9.3. (Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.10. Përcaktimi i përqendrimit të joneve të hidrogjenit (pH)

3.10.1. Pajisjet dhe materialet

Për të kryer testin përdorni:

pH metër;

gota laboratorike sipas GOST 25336-82;

hinka qelqi;

filtra letre.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.10.2. Kryerja e testit

Lëngu i mishit-pepton filtrohet përmes një filtri letre dhe pH në filtratin e pastër përcaktohet sipas udhëzimeve të përfshira me pH matësin.

3.11. Përcaktimi i sterilitetit

3.11.1. Pajisjet, materialet, reagentët

Për të kryer testin përdorni:

termostat me temperaturë ngrohje 37-38 °C;
filtra letre; në epruveta, të mbyllura me tapa garzë pambuku dhe kapak pergamenë dhe të sterilizuara në autoklave për 30 minuta me 1,5 kgf/cm.

3.11.3. Kryerja e testit

Lëngu i mishit-pepton (e gjithë seria) mbahet në një reaktor ose në shishe për tre ditë në temperaturën e dhomës. Një mostër sterile e lëngut të mishit-peptonit paketohet 100 cm në katër shishe me kapacitet 200 cm. Më pas lëngu i mishit-pepton mbillet në epruveta me MPB, MPA dhe MPPB. Inokulimet kryhen në 6-8 tuba me secilin medium. Inokulimi kryhet duke shtuar 0,2 cm të lëngut të testuar të mishit-peptonit në secilën epruvetë. Provëzat dhe shishet mbahen për tre ditë në një termostat në një temperaturë prej 37-38 °C. Mjetet në provëza dhe lëngu i mishit me pepton në shishe duhet të mbeten sterile.

3.11.2, 3.11.3. (Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.11.4. Përpunimi i rezultateve

Nëse ka rritje të mikroflorës në reaktor ose shishe, një seri supë mishi-pepton refuzohet. Nëse ka rritje të mikroflorës në të gjitha shishet dhe epruvetat, refuzohet gjithashtu një seri supë mishi-pepton.

Nëse ka rritje të mikroflorës në një shishe ose në një ose dy epruveta, kontrolli i sterilitetit përsëritet në dyfishin e numrit të shisheve dhe provëzave. Nëse mikroflora rritet përsëri, seria e supës së mishit-pepton refuzohet.

3.12. Përcaktimi i aftësisë për të mbështetur rritjen e mikrobeve

3.12.1. Pajisjet, materialet dhe reagentët

Për të kryer testin përdorni:

peshore teknike;

termostat;

autoklavë;

pH metër;

pipeta sipas GOST 20292-74;

biretat

3.12.2. Përgatitja për testin

Përgatitni agar mish-peptone sipas recetës aktuale në bazë të lëngut të testuar të mishit-peptonit, duke shtuar 2% agar mikrobiologjik në supë dhe vendosni pH-në e mediumit në 7.4.

Lëngu i testuar i mishit-peptonit dhe agari i përgatitur me pepton hidhen në epruveta 8-10 cm, mbyllen me tapa garzë pambuku dhe kapak pergamenë dhe sterilizohen në autoklavë për 30 minuta me 1,5 kgf/cm.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

3.12.3. Kryerja e testit

Supë sterile mish-peptone dhe agar mish-pepton inokulohen me kultura ditore: Staphylococcus aureus "Lassmanov", Esherichia coli, shtami 675, Streptococcus faccalis, shtame 6783, të marra nga Instituti Shtetëror Kërkimor për Standardizim dhe Kontroll të Përgatitjeve Mjekësore. L.A. Tarasevich. Çdo kulturë inokulohet duke përdorur një lak Pasteur në tre tuba me MPB dhe tre tuba me MPA. Inkubimi kryhet për 24 orë në një termostat në 37-38 °C.

Rritja e të korrave duhet të jetë tipike dhe e bollshme.

3.12.4. Përpunimi i rezultateve

Rritja tipike e kulturave ditore përcaktohet vizualisht dhe nën një mikroskop.

Intensiteti i rritjes në MPA vlerësohet vizualisht, në MPB - vizualisht dhe në një kolorimetër fotoelektrik në një gjatësi vale 620-640 nm në kuveta me gjatësi pune 5 mm.

4. PAKETIMI, EMËRTIMI, TRANSPORTI DHE RUAJTJA

______________
* Emri i seksionit. Botim i ndryshuar, Rev. N 1.

4.1. Lëngu i mishit-pepton ambalazhohet në mënyrë sterile në shishe qelqi (cilindra) me kapacitet 10±0,5 dhe 20±1 litër. Lejohet paketimi më i vogël - shishe me kapacitet 200 dhe 500 cm.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

4.2. Shishet mbyllen me tapa gome sterile, të cilat lidhen me letër furre sipër. Shishet mbyllen me tapa gome dhe mbështillen me kapak alumini.

(Botim i ndryshuar, Amendamenti nr. 1).

4.3. Etiketat e letrës janë ngjitur në shishe dhe shishe që tregojnë:

emri i barit;

sasia e barit, l;

numrat e serisë së barnave;

datat e prodhimit;

Data e skadencës;

kushtet e ruajtjes;

simbolet e këtij standardi.

4.4. Lëngu i mishit-pepton ruhet në një reaktor ose në shishe në një dhomë të pastër, të thatë dhe të errët në një temperaturë prej 4-10 °C.

4.5. Lëngu i mishit-pepton transportohet me të gjitha mjetet e transportit që i nënshtrohen kushteve të ruajtjes të specifikuara në pikën 4.4. Transporti në një temperaturë më të lartë lejohet, por jo më i lartë se 18 ° C, dhe periudha e transportit nuk duhet të kalojë pesë ditë.
.

GOST 10394-72 u prezantua për të zëvendësuar GOST 10394-63.

GOST 10515-75 u prezantua për të zëvendësuar GOST 10515-63.

GOST 10931-74 u prezantua për të zëvendësuar GOST 10931-64.

Teksti i dokumentit elektronik
përgatitur nga Kodeks Sh.A dhe verifikuar kundër:
publikim zyrtar
M.: Shtëpia Botuese e Standardeve, 1976

Shtoni 1% pepton në 100 ml lëng mishi.Peptoni është produkt i hidrolizës enzimatike të proteinave. Pepton shtohet në mjedis për të rritur vlerën e tij ushqyese; për të ngjeshur mjedisin, i shtohet 2 deri në 4% agar-agar.

Medium ushqyes d.b. pak acid në raport me citoplazmën e mikroorganizmave që do të rriten në të. Për ta bërë këtë, shtoni 0,5% kripë tryezë në medium. Reagimi i mjedisit është nga 7.0 në 7.4. Pas futjes së agar-agarit, përzierja nxehet derisa xhelatinizimi të mos jetë i plotë.

Përgatitja e mishit-peptonit xhelatinë.

Ky medium përgatitet në mënyrë të ngjashme me MPA, por për ngjeshje përdoret në agar-agar dhe xhelatinë në një sasi prej 10-12%. MPA ka një sërë përparësish mbi MPA. Kombinohet më mirë me qelqin; bakteret putrefaktive formojnë koloni shumë karakteristike kur rriten në këtë mjedis; përveç kësaj, disa nga bakteret kalbëzuese kanë aftësinë për të lëngëzuar xhelatinën, gjë që është shumë e rëndësishme për përcaktimin e llojit të baktereve. Por "MPZ" shkrihet në një temperaturë prej 30-37 0 C, kjo është pengesa e saj.

Gjatë studimit të karakteristikave biokimike të mikroorganizmave, përdoren mjete diagnostikuese diferenciale. Një shembull i mediave të tilla është Hiss media. Ato përdoren për të studiuar aftësinë e m.o. fermentojnë karbohidratet.

Përbërja e mediave Hiss përfshin 1% të çdo karbohidrati, 1% agar-agar dhe një tregues. Një shembull i një mediumi të tillë është mediumi Endo i përdorur për të izoluar Bact. coli Përbërja e këtij mediumi përfshin, përveç MPA, një zgjidhje të ngopur të alkoolit të fuchsin, 1% laktozë Na 2 SO 3, pH 7-7,2 Bact. coli prodhon koloni me një shkëlqim metalik në mjedisin Endo. Për të studiuar myqet, përdorni mediumin Sabouraud me përbërjen e mëposhtme: 1% glukozë, 1% pepton, 2% agar-agar pH 5-5,6.

RENDI I PUNËS:

Përgatitni 100 ml MPA:

1. Pini ujë në një tenxhere dhe vendoseni në zjarr për të përgatitur një banjë me ujë.

2. Në enë hidhen 100 ml MB. Peshoni 2 g pepton. 0,5 g agar-agar. E gjithë kjo vendoset në një enë me lëng mishi.

3. Balona vendoset në një tigan me ujë të nxehtë dhe përmbajtja e balonës nxehet derisa agar-agari të shkrihet plotësisht dhe mediumi të bëhet homogjen. Më pas shtoni sodë (derisa reaksioni të jetë pak alkalik ndaj lakmusit).

4. Mjeti i shkrirë hidhet në epruveta 10 ml.

5. Përgatitni tuba pambuku, mbulojeni me garzë dhe mbyllni tapat me lëndën ushqyese të përgatitur.

6. Testetat me MPA vendosen në shporta. Ato i janë dorëzuar një laboratori për sterilizim.

Klasifikimi i mediave kulturore

Në bazë të përbërjes, mjedisi ushqyes ndahet në 2 grupe: media natyrale me përbërje të pasigurt dhe media sintetike.

Natyrore zakonisht quhen media që përbëhen nga produkte me origjinë shtazore ose bimore që kanë një kimikat kompleks dhe të papërcaktuar. kompleks. Baza e mjediseve të tilla janë pjesë të ndryshme të bimëve të gjelbra dhe indeve shtazore. malt, maja, fruta, perime... Shumica e tyre përdoren në formë ekstraktesh ose infuzionesh. Sidoqoftë, mediat me një përbërje të pasigurt janë pak të dobishme për studimin e fiziologjisë së metabolizmit të mikroorganizmave, pasi ato nuk lejojnë marrjen parasysh të konsumit të një numri përbërësish të mediumit dhe, nga ana tjetër, identifikimin e substancave. të formuara gjatë zhvillimit të mikroorganizmave. Kjo për faktin se përbërja e lëndëve ushqyese natyrore është shumë komplekse, dhe për më tepër, nuk është konstante. Mjetet natyrore me përbërje të pasigurt përdoren kryesisht për mirëmbajtjen e kulturave të mikroorganizmave, grumbullimin e biomasës së tyre dhe për qëllime diagnostikuese. Mediat me përbërje të pasigurt përfshijnë gjithashtu të ashtuquajturat media "gjysmë sintetike". Përbërja e tyre, së bashku me kimikate të njohura. komponimet përfshijnë substanca me përbërje të pasigurt.Mediume të tilla përdoren gjerësisht në industri. mikrobiologjia për të marrë aminoacide, vitamina dhe antibiotikë. Si shembull i mediumeve të tilla, mund të përmendim: mjedisin mish-pepton, i cili njëkohësisht me ekstraktin e mishit dhe pepton përfshin kripën e tryezës, qull fosfat, ndonjëherë glukozë ose saharozë, media patate me glukozë ose pepton.

Media sintetike- këto janë media që përmbajnë vetëm përbërës të caktuar kimikisht të pastër, të marra në përqendrime të përcaktuara saktësisht. Mediat sintetike mund të kenë një grup relativisht të madh përbërësish, por mund të jenë mjaft të thjeshtë në përbërje. Mediat sintetike janë më të përshtatshmet për të studiuar metabolizmin e mikroorganizmave. Duke ditur përbërjen dhe sasinë e saktë të përbërësve të përfshirë në mjedis, është e mundur të studiohet konsumimi dhe shndërrimi i tyre në produktet metabolike përkatëse.

Sipas qëllimit: ekzistojnë mjedise diagnostikuese zgjedhore dhe diferenciale

Mjedise me zgjedhje të sigurojë zhvillimin e kryesisht një lloji të m.o. ose grupe mikroorganizmash të lidhur (më pak të përshtatshëm ose aspak të përshtatshëm për zhvillimin e të tjerëve). Media të tilla përdoren kryesisht për izolim.

Mikroorganizmat nga habitatet e tyre natyrore për të marrë kultura pasurimi.

Mjediset diagnostike diferenciale: janë mjedise që bëjnë të mundur dallimin (diferencimin) shumë shpejt të disa llojeve të m.o. nga të tjerët. Përbërja e tyre zgjidhet në atë mënyrë që të lejojë që të identifikohen qartë vetitë më karakteristike të këtij lloji m.o. Kjo shpesh arrihet duke futur ngjyra të veçanta treguese në media.

Sipas gjendjes fizike mediat ndahen në të lëngshme, të dendura dhe të grimcuara. Për të sqaruar karakteristikat fiziologjike dhe biokimike të mikroorganizmave, si dhe për të grumbulluar biomasë ose produkte metabolike të tyre, është më e përshtatshme të përdoren media të lëngshme. Mjetet e ngurta përdoren për të izoluar kulturat e pastra. Në biologjinë industriale, përdoren të ashtuquajturat media me shumicë. Këto përfshijnë melin e zier të njomur në një zgjidhje ushqyese.

Pyetje për vetëkontroll:

2. Si klasifikohen sipas gjendjes së tyre të grumbullimit?

3. Si ndahen mediat ushqyese sipas qëllimit të tyre të synuar? Në cilat raste është më i përshtatshëm përdorimi i një ose një mjedisi tjetër?

4. Cilat media quhen diagnostike diferenciale?

5. Si përgatiten mediat e kulturës? Cilët agjentë xhelatorë përdoren më shpesh?

6. Çfarë përfshihet në MAP? Si përgatitet?

7. Si ndryshon MPA nga MW?

Detyre shtepie:

1. Përgatitja e një raporti për mësimin laboratorik.

2. Përgatituni për të mbrojtur mësimin e laboratorit.

Punë laboratori nr.5

Supë mishi-pepton (MPB). Për të përgatitur median e mishit-pepton, përdorni lëng mishi, e cila përftohet si më poshtë: 500 g mish të freskët të grirë imët pa kocka, yndyrë dhe tendina hidhen në një tigan të emaluar me 1 litër ujë rubineti të ngrohur në 50°C dhe lihet të injektohet për 12 orë në temperaturën e dhomës ose 1 orë në 50-55°C. Mishi shtrydhet, ekstrakti filtrohet përmes garzë me një shtresë leshi pambuku, vlim 30 min për të mpiksur proteinat koloidale dhe për të filtruar dy herë (herën e parë përmes garzës me leshi pambuku, herën e dytë përmes një filtri letre). Filtrati shtohet me ujë deri në 1 litër, derdhet në balona, mbyllet me tapa leshi pambuku dhe sterilizohet në 120°C për 20 minuta (tapat e balonës mbyllen sipër me kapak letre). Prizat e pambukut duhet të jenë të ngushta, pasi shërbejnë si filtër për të parandaluar hyrjen e baktereve nga ajri pas sterilizimit.

Lëngu i mishit mund të përdoret në çdo kohë për të përgatitur mediat e duhura. Nëse përgatiten menjëherë, atëherë nuk kërkohet sterilizimi paraprak i supës së mishit.

Shpesh në kushte laboratorike, infuzioni i mishit zihet së bashku me mishin, pastaj mishi shtrydhet. Kjo rezulton në një supë me cilësi të mirë. Nëse keni nevojë për një lëng mishi me vlera veçanërisht të larta ushqyese, shtoni pak pepsinë ndërsa mishin e mbushni me ujë dhe acidizoni lëngun me acid klorhidrik. Pepsina nxit hidrolizën shtesë të përbërësve të proteinave të mishit dhe si rezultat, sasia e lëndëve ushqyese të disponueshme për bakteret rritet. Mishi mund të zëvendësohet me ekstrakt mishi (5 g për 1 litër medium).

Për të përgatitur MPB, shtoni 5-10 g në 1 litër lëng mishi pepton(produkti i parë i hidrolizës së proteinave) për të rritur përmbajtjen kalorike të mediumit dhe 5 g kripë tryezë për të krijuar aktivitet osmotik. Mediumi nxehet derisa peptoni të tretet, duke e përzier vazhdimisht.

Më pas krijohet një reaksion neutral ose pak alkalik i mediumit duke shtuar një tretësirë 20% të Na 2 CO 3 derisa letra e lagur e kuqe e lakmusit të bëhet blu. Është i përshtatshëm për të përdorur një tregues për të kontrolluar pH të mediumit bromthymolblau: 1-2 pika të saj përzihen në një filxhan porcelani me një pikë lëng mishi. Në një mjedis neutral, bromothymol blau është i gjelbër në shishe, në një mjedis acid është i verdhë dhe në një mjedis alkalik është blu.

Pasi të jetë vendosur pH, mediumi zihet sërish për 5-10 minuta dhe proteinat që janë mpiksur kur ndryshon reaksioni i mediumit, filtrohen përmes një filtri letre pa e zbardhur lëngun ose pa e pastruar me proteina. Për ta bërë këtë, rrahim të bardhën e vezës së freskët me dyfishin e vëllimit të ujit dhe përziejmë me lëng mishi të ftohur në 50 °C. Përzierja zihet duke e përzier në zjarr të ulët për 10 minuta, pastaj filtrohet. Lëpa e tejdukshme e mishit-pepton derdhet në provëza, mbyllet me priza pambuku dhe sterilizohet në 120 °C për 20 minuta.

Pepton agar i mishit (MPA). Shtoni 15-20 g agar në 1 litër MPB. Mjeti nxehet derisa agari të tretet (pika e tij e shkrirjes është 100 ° C, temperatura e ngurtësimit është 40 ° C), mediumi është pak alkalik me një zgjidhje 20% Na 2 CO 3 dhe derdhet përmes një hinke në epruveta (përafërsisht 10 ml agar në një kolonë për derdhje të mëvonshme në enët Petri dhe 5 ml secila për të marrë agar të pjerrët - tufa).

Kur derdhni agar, duhet të siguroheni që skajet e tubave të mbeten të thata, përndryshe tapat do të ngjiten në gotë. Tubat e provës me mediumin sterilizohen në një autoklave në 120 °C për 20 minuta.

Xhelatinë mish-pepton (MPG). Në 1 litër MPB shtoni 100-150 g xhelatinë. Pika e shkrirjes së xhelatinës varet nga përmbajtja e saj në mjedis: në rastin e një përqendrimi 10% në mjedis, ajo shkrihet në 24 ° C; në rastin e 15% - në 25 °C. Në verë, media përgatitet duke shtuar xhelatinë 15%.

Pas tretjes së xhelatinës, me ngrohje të kujdesshme, vendoset një reaksion pak alkalik i mediumit (si për MPB dhe MPA), zihet për 5 minuta, pastaj ftohet në 40-50 ° C. E bardha e vezës së rrahur me një sasi të vogël uji hidhet në një medium xhelatin të ftohur, tundet mirë dhe nxehet përsëri. Pasi proteinat precipitojnë, mediumi bëhet transparent. Filtrohet i nxehtë përmes një filtri letre, hidhet në epruveta dhe sterilizohet në një kazan Koch me avull që rrjedh, duke e ngrohur mediumin 3 herë për 30 minuta çdo 24 orë.

Agar patate. Pritini 200 gr patate të qëruara dhe të lara në feta, shtoni 1 litër ujë rubineti, ziejini për 30 minuta. Supa filtrohet përmes leshit të pambukut dhe uji i shtohet vëllimit origjinal. Lëngut që rezulton i shtohet agar 2%, zihet derisa të shkrihet dhe mediumi të jetë neutral (pH = 7). Mjeti sterilizohet për 20 minuta në 1 atm 1 .

Kantarioni i birrës dhe wort-agar. Kokrrat e elbit ngjyhen në ujë të ftohtë dhe mbijnë në 35 °C. Pasi filizat bëhen dyfish më të gjata se kokrrat, këto të fundit thahen në gjendje të thatë në ajër (mundësisht me ngrohje të ulët), duke marrë malt. Për të përgatitur lythin, malti bluhet në mënyrë të trashë dhe përzihet me ujë (250 g malt për 1 litër ujë). Për të izoluar më mirë enzimën e amilazës, përzierja nxehet në 57 ° C derisa të zhduket reagimi ndaj niseshtës (ngjyra blu me jod). Testet për sakarifikimin e niseshtës kryhen në një filxhan porcelani në një pikë lëngu.

Mjeti kullohet përmes leshit të pambukut, më pas filtrohet përmes një filtri letre. Ky lyth përmban 10-20% sheqer. Përmbajtja e tij e saktë përcaktohet nga dendësia e tretësirës duke përdorur një sakarimetër. Kantarioni hollohet me ujë në një përqendrim sheqeri prej 6-8% dhe sterilizohet për 30 minuta në 115 °C dhe presion prej 0,5 atm. Mjeti i gatshëm mund të merret nga fabrika e birrës.

Për gatim agar wort 2,5-3% agar shtohet në sallat e birrës, zihet derisa të shkrihet, filtrohet përmes leshit të pambukut dhe sterilizohet në të njëjtat kushte si lëngu i birrës.

Qumësht i skremuar. Për përgatitjen e mjediseve të kulturës, përdoret qumështi i skremuar, i ashtuquajturi qumësht i skremuar, pasi yndyra në qumësht ndikon negativisht në rritjen e disa mikroorganizmave. Qumështi i skremuar fitohet duke ndarë qumështin e ngrohur në 34 °C. Yndyra gjithashtu mund të hiqet kur qumështi vendoset.

Gjatë sterilizimit, duhet të mbani mend se qumështi nuk mund të mbahet në autoklave për një kohë të gjatë, pasi laktoza (sheqeri i qumështit) që përmbahet në qumësht mund të karamelizohet.

Qumështi i skremuar derdhet në epruveta sterile dhe mbahet në 115 °C (presion 0,5 atm) për 10 minuta. Përpara sterilizimit, aciditeti i qumështit të skremuar nuk duhet të kalojë 22° Turner, përndryshe qumështi do të thahet. Pas sterilizimit mbahet në termostat në 30°C për 3 ditë. për të provokuar zhvillimin e formave spore formuese dhe të tjera rezistente ndaj nxehtësisë. Pas 3 ditësh, tubat me qumësht ekzaminohen dhe ato në të cilat janë zhvilluar mikroorganizmat hidhen.

Kur sterilizohet në një autoklavë, skuqja e qumështit ndonjëherë është e mundur për shkak të karamelizimit të sheqerit të qumështit dhe peptonizimit të kazeinës. Gjatë sterilizimit të zgjatur, një precipitat i kazeinës bie në fund të tubit, i cili mund të peptonizohet pjesërisht. Qumështi i skuqur i mbinxehur nuk mund të përdoret si medium.

Media maja. Uji i tharmit. 50-100 g maja të thatë hollohen në 1 litër ujë, zihen për 10 minuta, filtrohet në një filtër letre dhe sterilizohet me avull të rrjedhshëm për 30 minuta çdo ditë për 3 ditë.

Autolizatë e majave. 200 g maja të shtypur hollohen në 1 litër ujë; shtoni 2 g Na 2 HPO 4, pika I N. Tretësirë NaOH (në pH 6.1) dhe 5 ml kloroform, e mbajtur në 37 °C për 2 ditë, e rregulluar me tretësirë NaOH në pH 7.4, e zier për 30 minuta. filtrohet përmes një filtri letre, derdhet në enë dhe sterilizohet në 115 ° ME 30 min.

Ekstrakti i majave. 1 kg maja e shtypur hollohet në 1 litër ujë, përzierja zihet për 1 orë, filtrohet tre herë përmes një filtri letre dhe sterilizohet në 115 ° C për 30 minuta.

Supë me fasule. 50 gr fasule (mundësisht të bardha) hidhen në 1 litër ujë rubineti dhe zihen derisa të zbuten në mënyrë që fasulet të mos zihen shumë. Supa që rezulton filtrohet përmes leshit të pambukut, i shtohen 10 g sheqer dhe sillen në vëllimin origjinal. Mjeti është pak alkalik, derdhet në balona dhe sterilizohet në autoklave për 30 minuta me presion avulli 1,5 atm.

1 Sipas sistemit SI, presioni zakonisht shprehet në paskale(Pa): 1 atm = 1,01325 x 10 5 Pa = 0,1 MPa.