น้ำซุปเปปโตนเนื้อแห้ง อาหารเลี้ยงเชื้อเปปโตนวุ้นเนื้อแบบง่าย

** องค์ประกอบได้รับการตรวจสอบและปรับแต่งเพื่อให้ตรงตามพารามิเตอร์ที่ต้องการ

การตระเตรียม:

ผสมผง 50.0 กรัมในน้ำกลั่น 1,000 มล. ต้มให้อนุภาคละลายหมด ฆ่าเชื้อด้วยการนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 1.1 บรรยากาศ (121°C) เป็นเวลา 15 นาที

หลักการและการประเมินผล:

แบคทีเรียจำนวนมากเติบโตอย่างล้นหลามบนอาหารชนิดนี้ ขอแนะนำให้ได้รับมวลจุลินทรีย์จำนวนมากในระหว่างการผลิตวัคซีนหรือสารพิษ

สารนี้มีองค์ประกอบคล้ายคลึงกับ Meat Extract Medium (ATCC Medium 225) การย่อยเนื้อเยื่อของสัตว์และการแช่เนื้อวัวในกระเพาะอาหารทำให้เกิดไนโตรเจน ซัลเฟอร์ วิตามิน และสารอื่นๆ ที่จำเป็นต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์อย่างอุดมสมบูรณ์ โซเดียมคลอไรด์ช่วยให้มั่นใจถึงความเป็นไอโซโทนิกของสิ่งแวดล้อม

ควบคุมคุณภาพ:

ลักษณะผง:

ผงสีเหลืองไหลเป็นเนื้อเดียวกัน

ความหนาแน่นของสื่อสำเร็จรูป:

ตัวกลางถูกสร้างขึ้นโดยมีความหนาแน่นเท่ากับเจลวุ้น 2.5%

สีและความโปร่งใสของสื่อสำเร็จรูป:

ตัวกลางมีสีเหลือง โปร่งใสหรือมีสีเหลือบเล็กน้อยหากมีเจลก่อตัวในจานเพาะเชื้อ

ความเป็นกรดของสิ่งแวดล้อม:

ที่ 25°C สารละลายในน้ำ (5.0% น้ำหนัก/ปริมาตร) มีค่า pH เท่ากับ 7.5 ± 0.2

ทรัพย์สินทางวัฒนธรรม:

ลักษณะการเจริญเติบโตของสายพันธุ์อ้างอิงหลังจาก 18-48 ชั่วโมงที่ 35°C

สายพันธุ์จุลินทรีย์ (ATSS)	ความสูง

สารอาหารอย่างง่าย น้ำซุปเนื้อ-เปปโตน (MPB) เป็นโปรตีนพื้นฐานของอาหารทุกชนิด เตรียมในน้ำเนื้อโดยเติมเปปโตนสำเร็จรูป เปปโตนเป็นผลิตภัณฑ์จากการย่อยโปรตีนที่ไม่สมบูรณ์ (ไฮโดรไลซิส) ซึ่งใช้เป็นแหล่งไนโตรเจนและคาร์บอน วุ้นเปปโตนเนื้อ (MPA) - ได้จากการเติม 1.5 - 3% a g ap - a g apa ลงใน MPB Agar-agar เป็นผลิตภัณฑ์สาหร่ายทะเลที่มีโพลีแซ็กคาไรด์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง

สารอาหารแบบเลือกสรรจะกระตุ้นการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิดและยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิด (โดยการเพิ่มส่วนประกอบบางอย่างลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ) เนื่องจากแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคจะเพิ่มจำนวนและสะสมในสภาพแวดล้อมเหล่านี้ จึงถูกเรียกว่าสภาพแวดล้อมเสริมคุณค่า ตัวอย่างเช่น อาหารเลี้ยงเชื้อมุลเลอร์ทำหน้าที่สะสมเชื้อซาลโมเนลลา ชอล์ก สารละลายของ Lugol และโซเดียมไฮโปซัลไฟต์จะถูกเติมลงในสารอาหาร เมื่อสารเหล่านี้ทำปฏิกิริยากัน จะเกิดโซเดียมเตตร้าไธโอเนตขึ้นซึ่งยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้ออีโคไล แต่จะสร้างสภาวะที่เอื้ออำนวยต่อการแพร่กระจายของเชื้อซัลโมเนลลา

สื่อการวินิจฉัยแยกโรคทำให้สามารถแยกแยะจุลินทรีย์ประเภทหนึ่งจากอีกประเภทหนึ่งโดยพิจารณาจากกิจกรรมทางชีวเคมีที่แตกต่างกันของแบคทีเรีย องค์ประกอบของสื่อการวินิจฉัยแยกโรคประกอบด้วย: - สารอาหารหลักที่ช่วยให้มั่นใจได้ถึงการแพร่กระจายของแบคทีเรีย - สารตั้งต้นทางเคมีบางชนิด ทัศนคติที่แตกต่างกันซึ่งเป็นสัญญาณการวินิจฉัย - ตัวบ่งชี้การเปลี่ยนสีซึ่งบ่งบอกถึงการสลายตัวของ สารตั้งต้นและการก่อตัวของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย

ส่วนประกอบ Endo ปานกลาง: สารอาหารวุ้น, แลคโตส, ฟูชินพื้นฐาน สื่อมีโทนสีชมพู อาณานิคมของแบคทีเรียที่หมักแลคโตสจะปรากฏเป็นสีแดงเข้ม อาณานิคมของแบคทีเรียที่ไม่หมักแลคโตสจะยังคงไม่มีสี

ส่วนประกอบขนาดกลางของเลวิน: วุ้นสารอาหาร แลคโตส อีโอซิน และเมทิลีนบลู สื่อมีโทนสีน้ำตาล อาณานิคมของแบคทีเรียที่หมักแลคโตสจะปรากฏเป็นสีน้ำเงินเข้ม อาณานิคมของแบคทีเรียที่ไม่หมักแลคโตสจะยังคงไม่มีสี

ส่วนผสมขนาดกลางของ Ploskirev: วุ้นสารอาหาร, แลคโตส, สีแดงเป็นกลาง, เกลือน้ำดี, สีเขียวสดใส สื่อมีโทนสีชมพูเหลือง โคโลนีของแบคทีเรียที่หมักแลคโตสนั้นมีสีแดงลิงกอนเบอร์รี่ อาณานิคมของแบคทีเรียที่ไม่หมักแลคโตสจะยังคงไม่มีสี

เทคนิคการปลูกเชื้อ วิธี Drigalski: หยดวัสดุทดสอบลงในจานเพาะเชื้อจานแรก แล้วใช้ไม้พายฆ่าเชื้อเกลี่ยให้ทั่วพื้นผิวของตัวกลาง จากนั้นด้วยไม้พายเดียวกัน (โดยไม่ต้องเผาในเปลวไฟจากเตา) การหว่านแบบเดียวกันจะทำในถ้วยที่สองและสาม เมื่อมีการฉีดเชื้อแบคทีเรียแต่ละครั้ง ไม้พายจะคงเหลืออยู่บนไม้พายน้อยลงเรื่อยๆ และเมื่อหว่านบนจานที่สาม แบคทีเรียจะถูกกระจายไปทั่วพื้นผิวของสารอาหารที่แยกจากกัน และจะเกิดโคโลนีที่แยกออกจากกัน การหว่านแบบวนเป็นจังหวะขนาน

การหว่านแบบวนเป็นจังหวะขนาน อาณานิคมเป็นกลุ่มที่แยกได้ซึ่งมองเห็นได้ซึ่งเป็นตัวแทนของจุลินทรีย์ประเภทหนึ่งซึ่งเกิดขึ้นเมื่อเซลล์แบคทีเรียหนึ่งเซลล์เพิ่มจำนวนบนอาหารที่เป็นของแข็ง อาณานิคมของแบคทีเรียสายพันธุ์ต่าง ๆ มีความแตกต่างกันในลักษณะทางวัฒนธรรม

GOST 20730-75

กลุ่ม P35

มาตรฐานสถานะของสหภาพโซเวียต

สารอาหาร

น้ำซุปเนื้อเปปโตน (เพื่อวัตถุประสงค์ทางสัตวแพทย์)

ข้อมูลจำเพาะ

สื่อสารอาหาร น้ำซุปเนื้อเปปตัน (สำหรับสัตวแพทย์) ข้อมูลจำเพาะ*

______________
*ชื่อของมาตรฐาน ฉบับแก้ไขเพิ่มเติม สาธุคุณ ยังไม่มีข้อความ 1.
 

ตามมติของคณะกรรมการมาตรฐานแห่งรัฐของคณะรัฐมนตรีของสหภาพโซเวียตลงวันที่ 9 เมษายน 2518 N 899 ระยะเวลาที่ใช้ได้ถูกกำหนดตั้งแต่ 01/01/1976 ถึง 01/01/1981*
________________
* ระยะเวลาที่ใช้ได้ถูกยกเลิกตามพิธีสารหมายเลข 4-93 ของสภาระหว่างรัฐเพื่อการมาตรฐาน มาตรวิทยา และการรับรอง (IUS หมายเลข 4, 1994) - หมายเหตุของผู้ผลิตฐานข้อมูล

ออกใหม่ สิงหาคม 2518

แก้ไขเพิ่มเติม การเปลี่ยนแปลงครั้งที่ 1 ได้รับการอนุมัติและมีผลใช้บังคับในวันที่ 01/01/90 โดยพระราชกฤษฎีกามาตรฐานแห่งสหภาพโซเวียตเมื่อวันที่ 06/28/89 N 2194

การเปลี่ยนแปลงครั้งที่ 1 จัดทำโดยผู้ผลิตฐานข้อมูลตามข้อความของ IUS No. 11, 1989


มาตรฐานนี้ใช้กับน้ำซุปเปปโตนเนื้อซึ่งเป็นสารละลายสารอาหารที่มีจุดประสงค์เพื่อการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์

1. ข้อกำหนดทางเทคนิค

1. ข้อกำหนดทางเทคนิค

1.1. น้ำซุปเปปโตนเนื้อจะต้องผลิตตามกฎระเบียบทางเทคโนโลยีในปัจจุบันจากน้ำสำหรับเนื้อสัตว์ตาม GOST 20729-75 โดยเติมเปปโตน 1% และโซเดียมคลอไรด์ 0.5% ในการเจือจาง 1:1, 1:2 และ 1:4

1.2. น้ำซุปเปปโตนเนื้อในแง่ของตัวชี้วัดทางเคมีกายภาพ ชีวเคมี และชีวภาพ จะต้องเป็นไปตามข้อกำหนดและมาตรฐานที่ระบุในตารางที่ 1

ตารางที่ 1

ชื่อตัวบ่งชี้	บรรทัดฐานสำหรับการเจือจาง
รูปร่าง	ของเหลวใส
	สีเหลือง	สีเหลืองอ่อน
	สารสกัดเนื้อสดและเปปโตนโดยเฉพาะ
การมีอยู่ของสิ่งเจือปนทางกล เชื้อรา สะเก็ด และตะกอน	ไม่ได้รับอนุญาต
เศษส่วนมวลของไนโตรเจนทั้งหมด % ไม่น้อย
เศษส่วนมวลของไนโตรเจน หมู่อะมิโน กรดอะมิโน และเปปไทด์ล่าง % ไม่น้อย
เศษส่วนมวลของเปปโตน % ไม่น้อย
เศษส่วนมวลของวัตถุแห้ง % ไม่น้อย
เศษส่วนมวลของโปรตีน % ไม่มีอีกแล้ว
เศษส่วนมวลของโซเดียมคลอไรด์, %
ความเข้มข้นของไฮโดรเจนไอออน (pH)
ความเป็นหมัน	การหว่านบนสารอาหารไม่ควรทำให้เกิดการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์เป็นเวลา 3 วันในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37-38 ° C
ความสามารถในการรองรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์, ความหนาแน่นของแสงไม่น้อยสำหรับ
Staphylococcus aureus "ลอสมานอฟ"			ความสูงเป็นเรื่องปกติ
เชื้อเอสเชอริเคีย โคไล สายพันธุ์ 675
สเตรปโตคอคคัส ฟีคาลิส สายพันธุ์ 6783

1.1, 1.2. (แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

2. กฎการยอมรับ

2.1. ให้น้ำซุปเนื้อเปปโตนและถ่ายเป็นชุด

2.2. น้ำซุปเปปโตนเนื้อแต่ละชุดในสถานประกอบการอุตสาหกรรมชีวภาพของกระทรวงเกษตรของสหภาพโซเวียตจะต้องได้รับการยอมรับจากผู้ควบคุมของรัฐของสถาบันควบคุมวิทยาศาสตร์แห่งรัฐ All-Union แห่งการเตรียมการสัตวแพทย์ของกระทรวงเกษตรของสหภาพโซเวียต

2.3. ชุดผลิตภัณฑ์ควรเข้าใจว่าเป็นปริมาณใดๆ ของน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่ผลิตได้ในวงจรเทคโนโลยีเดียว ในภาชนะเดียว (เครื่องปฏิกรณ์) และบันทึกไว้ในเอกสารคุณภาพชุดเดียว

2.4. ในการตรวจสอบคุณภาพของยา 2 ลิตรจะถูกนำมาจากน้ำซุปเปปโตนเนื้อแต่ละชุดมากกว่า 50 ลิตรและ 0.6 ลิตรสำหรับปริมาตรน้อยกว่า 50 ลิตร

หากน้ำซุปเปปโตนทั้งชุดบรรจุในขวด ให้ทำตัวอย่างในปริมาณหนึ่งขวด หากบรรจุน้ำซุปเปปโตนเนื้อในขวด ให้เลือกขวดจำนวนหนึ่งเพื่อให้ปริมาตรของน้ำซุปเปปโตนเนื้อในขวดที่เลือกนั้นสอดคล้องกับบรรทัดฐานข้างต้น ซึ่งกำหนดขึ้นอยู่กับปริมาตรรวมของซีรีส์ ของน้ำซุปเนื้อเปปโตน

2.5. หากได้รับผลการทดสอบที่ไม่น่าพอใจสำหรับตัวบ่งชี้อย่างน้อยหนึ่งตัว จะถือว่าชุดน้ำซุปเปปโตนเนื้อไม่เป็นไปตามข้อกำหนดของมาตรฐานนี้

2.6. การทดสอบการควบคุมตัวอย่างตามคำขอของผู้บริโภคดำเนินการโดยสถาบันวิทยาศาสตร์และการควบคุมยาสัตวแพทย์แห่งรัฐ All-Union ของกระทรวงเกษตรของสหภาพโซเวียต

3. วิธีการทดสอบ

3.1. วิธีการสุ่มตัวอย่าง

3.1.1. ตัวอย่างน้ำซุปเปปโตนเนื้อจำนวน 2 หรือ 0.6 ลิตร (ขึ้นอยู่กับปริมาตรของชุดยา) จะถูกนำมาจากเครื่องปฏิกรณ์หรือขวดในลักษณะปลอดเชื้อ

ตัวอย่างขนาด 2 ลิตรบรรจุในขวดขนาด 10,200 ซม. ห้าขวดใช้สำหรับการวิเคราะห์และเหลืออีกห้าขวดในที่เก็บถาวรของตัวควบคุมสถานะ

ตัวอย่างที่นำมาจากชุดน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่มีปริมาตรน้อยกว่า 50 ลิตรจะไม่เหลืออยู่ในที่เก็บถาวร

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.2. ลักษณะ สี การมีอยู่ของสิ่งเจือปนเชิงกล แม่พิมพ์ เกล็ด และตะกอนจะถูกกำหนดโดยการดูขวดและขวดที่มีน้ำซุปเปปโตนเนื้อในแสงที่ส่องผ่าน ซึ่งเขย่าขวด พลิกฝาลง และเขย่าขวด

3.3. กลิ่นของน้ำซุปเนื้อ-เปปโตนจะถูกกำหนดโดยทางประสาทสัมผัสในตัวอย่าง

3.4. การหาปริมาณไนโตรเจนทั้งหมด

3.4.1. อุปกรณ์และรีเอเจนต์



เครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์

ขวดเจลดาห์ลที่มีความจุ 50-100 ซม. ตามมาตรฐาน GOST 25336-82

อุปกรณ์ไมโครเจลดาห์ล;

องค์ประกอบความร้อน (เตา, เตา);

ปิเปตที่ 1, 2, 5 ซม. ตาม GOST 20292-74

บิวเรตตาม GOST 20292-74;

น้ำกลั่นตาม GOST 6709-72

กรดซัลฟิวริกตาม GOST 4204-77 เข้มข้นและสารละลาย 0.1 N

โซเดียมออกไซด์ไฮเดรตตาม GOST 4328-77, 30-33% และ 0.1 N สารละลายที่เตรียมในน้ำกลั่นที่ต้มไว้ล่วงหน้า

ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ตาม GOST 10929-76;

เมทิลแดง

เมทิลีนสีน้ำเงิน

เอทิลแอลกอฮอล์แก้ไขตาม GOST 5962-67;

เมทิลออเรนจ์สารละลาย 0.1%

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.4.2. ดำเนินการทดสอบ

ใส่น้ำซุปเปปโตนเนื้อปริมาณ 1 ซม. ในขวดเจลดาห์ล และเติมกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 2 ซม. ขวดแก้วรูปลูกแพร์หรือกรวยขนาดเล็กที่มีปลายปิดผนึกจะถูกสอดเข้าไปในคอของขวด และตัวอย่างจะถูกทำให้เป็นแร่ โดยอันดับแรกใช้ความร้อนต่ำ จากนั้นระดับความร้อนจะเพิ่มขึ้น เพื่อป้องกันไม่ให้ส่วนผสมที่เดือดโยนลงไปในขวด ส่วนที่แคบของขวด การทำให้เป็นแร่จะดำเนินการเมื่อมีตัวเร่งปฏิกิริยา - ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ หลังจากเริ่มเดือดให้เติมตัวเร่งปฏิกิริยา 0.5 ซม. ทุกๆ 15-20 นาทีจนกระทั่งสารละลายเปลี่ยนสีหมด

หลังจากเย็นตัวลง เนื้อหาของขวดจะถูกถ่ายโอนไปยังขวดกลั่น โดยเติมน้ำกลั่น 10-12 ซม. ตรวจสอบความสมบูรณ์ของการถ่ายโอนโดยใช้ตัวบ่งชี้เมทิลสีส้ม น้ำล้างส่วนสุดท้ายควรยังคงเป็นสีเหลือง

สารละลายกรดซัลฟิวริก 0.1 นอร์มัล 20 ซม. และตัวบ่งชี้ Tashiro 2 หยดถูกเทลงในขวดรับของอุปกรณ์เจลดาห์ล ตัวบ่งชี้ Tashiro เตรียมโดยการละลายเมทิลเรด 0.4 กรัมและเมทิลีนบลู 0.2 กรัมในเอทิลแอลกอฮอล์ 96% 200 ซม.

ขวดปอกเชื่อมต่อกับตู้เย็นและเครื่องกำเนิดไอน้ำ สารที่อยู่ในขวดกลั่นจะถูกทำให้เป็นกลางด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 30-33% โดยใช้ตัวบ่งชี้เมทิลสีส้ม การกลั่นจะดำเนินการจนกว่าจะรวบรวมสารละลายประมาณ 70 ซม. ในขวดรับ

ปริมาณในขวดรับจะถูกไตเตรทด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N จนกระทั่งสีของสารละลายเปลี่ยนจากสีม่วงเป็นสีเขียว

ในเวลาเดียวกันจะมีการทดลองควบคุมกับรีเอเจนต์ซึ่งแทนที่จะใช้น้ำซุปเปปโตนเนื้อน้ำกลั่น 1 ซม. จะถูกนำเข้าไปในขวดเพื่อทำให้เป็นแร่

3.4.3. กำลังประมวลผลผลลัพธ์

ปริมาณไนโตรเจนทั้งหมดในน้ำซุปเนื้อเปปโตน () เป็นเปอร์เซ็นต์คำนวณโดยใช้สูตร

โดยที่ปริมาณสารละลายกรดซัลฟิวริก 0.1 N ที่เทลงในขวดรับคือ cm;

- ปัจจัยการแก้ไขไทเทอร์ของกรดซัลฟิวริก 0.1 N

- ปริมาณสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 นอร์มัลที่ใช้สำหรับการไตเตรทตัวอย่างทดสอบหรือในการทดลองควบคุม cm


- ปริมาณน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่นำมาวิเคราะห์ cm;

0.0014 - ปริมาณไนโตรเจนที่สอดคล้องกับสารละลายกรดซัลฟิวริก 0.1 N 1 ซม., กรัม

ผลการทดสอบขั้นสุดท้ายถือเป็นความแตกต่างระหว่างค่าเฉลี่ยเลขคณิตของการหาค่าแบบขนานสองค่าในตัวอย่างทดลองและตัวอย่างควบคุม ความแตกต่างที่อนุญาตระหว่างผลลัพธ์ของการวัดแบบคู่ขนานสองครั้งไม่ควรเกิน ±0.5%

3.4.2, 3.4.3. (แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.5. การหาปริมาณไนโตรเจนของกลุ่มอะมิโนของกรดอะมิโนและเปปไทด์ตอนล่าง

3.5.1. อุปกรณ์ วัสดุ และรีเอเจนต์

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

เครื่องวัดค่า pH;

บีกเกอร์ในห้องปฏิบัติการตาม GOST 25336-82

ปิเปต, บิวเรตตาม GOST 20292-74;

ฟอร์มาลินทางเทคนิคตาม GOST 1625-75;

โซเดียมออกไซด์ไฮเดรตตาม GOST 4328-77, สารละลาย 0.1 N;

ฟีนอลธาทาลีน, สารละลายแอลกอฮอล์ 1%;

น้ำกลั่นตาม GOST 6709-72

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.5.2. การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบ

ทันทีก่อนการวิเคราะห์ จะมีการเตรียมส่วนผสมของฟอร์มอล ในการทำเช่นนี้ ให้เติมสารละลายฟีนอล์ฟทาลีน 1% 1 ซม. ลงในฟอร์มาลิน 50 ซม. แล้วทำให้ส่วนผสมเป็นสีชมพูเล็กน้อยด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N

3.5.3. ดำเนินการทดสอบ

เติมน้ำกลั่น 18 ซม. ลงในน้ำซุปเปปโตนเนื้อ 2 ซม. และปรับ pH ของส่วนผสมเป็น 7.0 ด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N จากนั้น เติมส่วนผสมของฟอร์มอล 2 ซม. และไตเตรตแบบโพเทนชิโอเมตริกด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N ให้ pH 9.2 กวนอย่างต่อเนื่อง

ในเวลาเดียวกันจะมีการทดลองควบคุมกับรีเอเจนต์ซึ่งแทนที่จะใช้น้ำซุปเปปโตนเนื้อ 2 ซม. จะใช้น้ำกลั่น 2 ซม.

3.5.4. กำลังประมวลผลผลลัพธ์

ปริมาณไนโตรเจนของกลุ่มอะมิโนของกรดอะมิโนและเปปไทด์ที่ต่ำกว่าในน้ำซุปเนื้อเปปโตน () เป็นเปอร์เซ็นต์คำนวณโดยใช้สูตร

โดยที่ปริมาณสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N ที่ใช้สำหรับการไตเตรทของตัวอย่างทดสอบคือ cm;

- ปริมาณสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N ที่ใช้สำหรับการไตเตรทในการทดลองควบคุม cm;

- ปัจจัยการแก้ไขไทเทอร์ของสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 นอร์มัล

0.0014 - ปริมาณไนโตรเจนที่สอดคล้องกับสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N 1 ซม., g;

2 - ปริมาณน้ำซุปเปปโตนที่นำมาวิเคราะห์ดู

ค่าเฉลี่ยเลขคณิตของผลลัพธ์ของการหาค่าแบบคู่ขนานสองครั้งถือเป็นผลการทดสอบขั้นสุดท้าย ความแตกต่างที่อนุญาตระหว่างผลลัพธ์ของการกำหนดแบบขนานไม่ควรเกิน ±0.2%

3.5.2-3.5.4. (แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.6. การกำหนดปริมาณเปปโตน

3.6.1. อุปกรณ์ วัสดุ และรีเอเจนต์

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

โฟโตอิเล็กทริคคัลเลอริมิเตอร์หรือสเปกโตรโฟโตมิเตอร์

ปิเปตตาม GOST 20292-74;

หลอดทดลองตาม GOST 25336-82

โซเดียมออกไซด์ไฮเดรตตาม GOST 4328-77, สารละลาย 10%;

คอปเปอร์ซัลเฟตตาม GOST 4165-78, สารละลาย 2%;

น้ำกลั่นตาม GOST 6709-72

เครื่องหมุนเหวี่ยงแบบตั้งโต๊ะประเภท OPN-8-14.2

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.6.2. การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบ

3.6.2.1. เมื่อสร้างกราฟการสอบเทียบ ความเข้มข้นของเปปโทนจริงจะถูกพล็อตเป็นเปอร์เซ็นต์ตามแกนแอบซิสซา และความหนาแน่นเชิงแสง () จะถูกพล็อตไปตามแกนกำหนดตามข้อมูลที่ให้ไว้ในตารางที่ 2

ตารางที่ 2

ความเข้มข้นของเปปโตนแท้ %	ความหนาแน่นของแสง

3.6.3. ดำเนินการทดสอบ

น้ำซุปเนื้อเปปโตน 10 ซม. ที่เจือจาง 1:10 เทลงในหลอดทดลองและเติมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 10% 1 ซม. และสารละลายคอปเปอร์ซัลเฟต 2% ส่วนผสมถูกเขย่าให้เข้ากันหลังจากเติมรีเอเจนต์แต่ละตัว

ในเวลาเดียวกันมีการทดลองควบคุมสำหรับรีเอเจนต์ซึ่งแทนที่จะใช้น้ำซุปเปปโตนเนื้อเจือจาง 10 ซม. จะใช้น้ำกลั่น 10 ซม.

หลังจากผ่านไป 2 นาที ส่วนผสมจะถูกปั่นแยกเป็นเวลา 10 นาทีด้วยความเร็วการหมุน 3000-4000 ความเข้มของสีวัดโดยใช้โฟโตอิเล็กโตรคัลเลอร์ริมิเตอร์ที่ความยาวคลื่น 540-560 นาโนเมตร หรือสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่ 540 นาโนเมตรในคิวเวตที่มีความยาวในการทำงาน 10 มม.

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.6.4. กำลังประมวลผลผลลัพธ์

ความเข้มข้นของเปปโตนที่แท้จริงในน้ำซุปเปปโตนเนื้อถูกกำหนดโดยใช้กราฟการปรับเทียบ

ความหนาแน่นเชิงแสง () ของน้ำซุปเนื้อ-เปปโตนเท่ากับความแตกต่างของความหนาแน่นเชิงแสงในการทดลองกับตัวอย่างทดสอบและในการทดลองควบคุม ความเข้มข้นของเปปโตนที่แท้จริงที่ได้จากกราฟจะคูณด้วย 10 (นั่นคือ โดยการเจือจางของน้ำซุปเปปโตนเนื้อ)

ค่าเฉลี่ยเลขคณิตของผลลัพธ์ของการหาค่าแบบคู่ขนานสองครั้งถือเป็นผลการทดสอบขั้นสุดท้าย ความแตกต่างที่อนุญาตระหว่างผลลัพธ์ของการพิจารณาแบบขนานไม่ควรเกิน ±5%

3.7. การกำหนดปริมาณวัตถุแห้ง

3.7.1. อุปกรณ์

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

เครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์

ตู้อบแห้งในห้องปฏิบัติการ

เครื่องดูดความชื้นตาม GOST 25336-82;

ถ้วยสำหรับชั่งน้ำหนัก (จำนวนมาก) ตาม GOST 25336-82

ปิเปตตาม GOST 20292-74

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.7.2. ดำเนินการทดสอบ

ขวดชั่งน้ำหนักซึ่งก่อนหน้านี้ทำให้แห้งจนมีน้ำหนักคงที่นั้นชั่งน้ำหนักโดยมีข้อผิดพลาดไม่เกิน 0.0002 กรัมของน้ำซุปเปปโตนเนื้อในปริมาณ 1.0-1.2 กรัม จากนั้นขวดที่มีน้ำซุปเปปโตนเนื้อจะถูกทำให้แห้งในเตาอบที่อุณหภูมิ อุณหภูมิ 100-105 ° C จนกระทั่งมวลคงที่ การทำให้แห้งจะดำเนินต่อไปจนกระทั่งความแตกต่างระหว่างการชั่งน้ำหนักสองครั้งต่อมาคือไม่เกิน 0.0002 กรัม

บันทึก. การเพิ่มขึ้นของมวลระหว่างการชั่งน้ำหนักครั้งหนึ่งระหว่างกระบวนการทำให้แห้งจะไม่ถูกนำมาพิจารณาในการคำนวณ

3.7.3. กำลังประมวลผลผลลัพธ์

ปริมาณวัตถุแห้งในน้ำซุปเนื้อ-เปปโตน () เป็นเปอร์เซ็นต์คำนวณโดยใช้สูตร

มวลของขวดเปล่าที่มีฝาปิดอยู่ที่ไหน g;

- น้ำหนักของขวดที่มีฝาปิดและน้ำซุปเปปโตนเนื้อก่อนอบแห้ง g;

- น้ำหนักของขวดที่มีฝาปิดและน้ำซุปเปปโตนเนื้อหลังจากการอบแห้ง g;

ค่าเฉลี่ยเลขคณิตของผลลัพธ์ของการหาค่าแบบคู่ขนานสองครั้งถือเป็นผลการทดสอบขั้นสุดท้าย ความแตกต่างที่อนุญาตระหว่างผลลัพธ์ของการพิจารณาแบบขนานไม่ควรเกิน 0.2%

3.8. การกำหนดปริมาณโปรตีน (ตามวิธี Lowry)

3.8.1. อุปกรณ์และรีเอเจนต์

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

โฟโตอิเล็กทริคคัลเลอริมิเตอร์

หลอดทดลองแก้วตาม GOST 25336-82

ปิเปตตาม GOST 20292-74;

ตัวกรองกระดาษ

โซเดียมออกไซด์ไฮเดรตตาม GOST 4328-77, 0.1 n สารละลาย;

โซเดียมคาร์บอเนตตาม GOST 84-76;

โซเดียมทาร์เตรตหรือโพแทสเซียมทาร์เตรตถูกแทนที่, สารละลาย 1%;

คอปเปอร์ซัลเฟตตาม GOST 4165-78;

โซเดียมทังสติกตาม GOST 18289-78;

โซเดียมโมลิบเดตตาม GOST 10931-74;

กรดออร์โธฟอสฟอริก 85%;

กรดไฮโดรคลอริกตาม GOST 3118-67 *;
________________
* GOST 3118-77 มีผลบังคับใช้ในอาณาเขตของสหพันธรัฐรัสเซีย - หมายเหตุของผู้ผลิตฐานข้อมูล

ลิเธียมซัลเฟต

โบรมีนตาม GOST 4109-79;

น้ำกลั่นตาม GOST 6709-72

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.8.2. การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบ

การเตรียมรีเอเจนต์ A

ตัวอย่างโซเดียมคาร์บอเนตที่มีน้ำหนัก 2 กรัมซึ่งชั่งน้ำหนักโดยมีข้อผิดพลาดไม่เกิน 0.02 กรัมละลายใน 100 ซม. ของ 0.1 N สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ หากสารละลายมีเมฆมาก จะต้องกรองก่อนทำการพิจารณา

การเตรียมรีเอเจนต์ B

ตัวอย่างคอปเปอร์ซัลเฟตที่มีน้ำหนัก 0.5 กรัมซึ่งชั่งน้ำหนักโดยมีข้อผิดพลาดไม่เกิน 0.02 กรัมถูกละลายใน 100 ซม. ของสารละลาย 1% ของโซเดียมหรือโพแทสเซียมทาร์เตรตที่ถูกแทนที่ หากสารละลายมีเมฆมาก จะต้องกรองก่อนทำการพิจารณา

การเตรียมรีเอเจนต์ C

รีเอเจนต์ C เตรียมทันทีก่อนการพิจารณาโดยการผสมรีเอเจนต์ A 50 ส่วนและรีเอเจนต์ B 1 ส่วน

การเตรียมรีเอเจนต์ D

รีเอเจนต์ D (รีเอเจนต์ของโฟลิน) เตรียมอยู่ในขวดแก้วทนไฟก้นกลมขนาด 1 ลิตร พร้อมด้วยคอนเดนเซอร์แบบไหลย้อน

ใส่กรดโซเดียม tungstic 100 กรัม, โซเดียมโมลิบเดต 25 กรัม และน้ำกลั่น 700 มล. ลงในขวด หลังจากที่เกลือละลายหมดแล้ว ให้เติมกรดออร์โธฟอสฟอริก 85% 50 ซม. และกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 100 ซม. ลงในขวด ส่วนผสมในขวดผสมกันอย่างระมัดระวังแต่อย่างดี คอนเดนเซอร์ไหลย้อนเชื่อมต่อกับขวดและต้มส่วนผสม (ไม่มากเกินไป) เป็นเวลา 10 ชั่วโมง การต้มสามารถทำได้เป็นระยะ ๆ แต่คำนึงถึงระยะเวลาการเดือดเท่านั้น

หลังจากเดือด ให้เติมลิเธียมซัลเฟต 150 กรัม น้ำกลั่น 50 ซม. และโบรมีน 5 หยด (อย่างระมัดระวัง) ลงในส่วนผสม หากต้องการกำจัดโบรมีนส่วนเกิน ให้ต้มสารละลายเป็นเวลา 15 นาทีโดยไม่ต้องแช่เย็นใต้ลม หลังจากเย็นตัวลง สารละลายที่เสร็จแล้วจะถูกนำไปใส่ในขวดปริมาตรขนาด 1 ลิตร กรองผ่านตัวกรองกระดาษ และเก็บไว้ในขวดสีเข้มโดยมีจุกปิดในที่มืด รีเอเจนต์ D ควรเป็นสีเหลืองฟางโดยไม่มีสีเขียว จากนั้นจึงหาความเข้มข้นของกรดในรีเอเจนต์ ในการทำเช่นนี้ รีเอเจนต์ที่เตรียมไว้จะถูกเจือจางด้วยน้ำกลั่น 1:10 (รีเอเจนต์ 1 ซม. และน้ำ 9 ซม.) และไตเตรทด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 N เทียบกับฟีนอล์ฟทาลีน (3-4 หยด) ความเป็นกรดคำนวณโดยการหารจำนวนมิลลิลิตร 0.1 N ของอัลคาไลที่ใช้ไตเตรท D 1 ซม. คูณ 10 รีเอเจนต์ D มีความเป็นกรด 1.6-2.3 N

การเตรียมรีเอเจนต์ E

รีเอเจนต์ E คือรีเอเจนต์ D เจือจางเป็น 1 N สารละลาย. ตัวอย่างเช่น หากรีเอเจนต์ D เป็นสารละลายกรด 2.3 N ดังนั้นในการเตรียมสารละลาย E 1 N คุณต้องใช้รีเอเจนต์ D 10 ซม. และน้ำกลั่น 13 ซม.

การสร้างกราฟเทียบมาตรฐานสำหรับการตรวจวัดโปรตีน

มีการเตรียมชุดสารละลายที่มีปริมาณโปรตีนซึ่งมีความเข้มข้นลดลงจาก 0.10 ถึง 0.01% โดยจะทำปฏิกิริยาสีตามข้อ 3.8.3 ในการเตรียมสารละลาย คุณสามารถใช้อัลบูมิน ไมโอซิน และเซรั่มเนทีฟได้ ปริมาณโปรตีนในสารละลายถูกกำหนดตามเจลดาห์ล ความเข้มของสีวัดโดยใช้โฟโตอิเล็กโตรคัลเลอร์มิเตอร์เทียบกับน้ำ ความหนาแน่นเชิงแสงของสารควบคุมสำหรับรีเอเจนต์ถูกลบออกจากความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายโปรตีน และค่าผลลัพธ์จะถูกพล็อตตามแนวพิกัด แกนแอบซิสซาแสดงความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย (เป็นเปอร์เซ็นต์หรือมิลลิกรัม)

เลือกการเจือจางตัวอย่างทดสอบเพื่อตั้งค่าปฏิกิริยาสี โดยให้จำนวนการวัดหลักในแง่ของความหนาแน่นของแสงอยู่ในช่วง 0.2-0.8 โดยที่ความแม่นยำในการวัดจะสูงที่สุด

3.8.3. ดำเนินการทดสอบ

น้ำซุปเปปโตนเนื้อ 1 ซม. เจือจาง 1:10 เทลงในหลอดทดลอง เติมรีเอเจนต์ C 5 ซม. ผสมและหลังจากผ่านไป 10 นาที ให้เติมรีเอเจนต์ E 0.5 ซม. ในเวลาเดียวกันจะมีการควบคุมรีเอเจนต์ ดำเนินการซึ่งแทนที่จะใช้น้ำซุปเปปโตนเนื้อน้ำกลั่น 1 ซม. จะถูกนำน้ำมาและเติมรีเอเจนต์แบบเดียวกับในหลอดทดลองที่มีน้ำซุปเปปโตนเนื้อ ผสมให้เข้ากันแล้ววางในที่มืดเป็นเวลา 30-40 นาที

ความเข้มของสีวัดบนโฟโตอิเล็กโตรคัลเลอร์มิเตอร์ที่มีฟิลเตอร์สีแดง (630-640 นาโนเมตร) เทียบกับน้ำในคิวเวตขนาด 5 มม. จากค่าความหนาแน่นเชิงแสงของตัวอย่างทดสอบ ค่าความหนาแน่นเชิงแสงของตัวควบคุมสำหรับรีเอเจนต์จะถูกลบออก ขึ้นอยู่กับค่าที่ได้รับของความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลาย ปริมาณโปรตีนในตัวอย่างจะถูกกำหนดโดยใช้กราฟการสอบเทียบ เมื่อคำนวณปริมาณโปรตีนในตัวอย่าง จะพิจารณาปัจจัยการเจือจางก่อนทำปฏิกิริยากับสี

ค่าเฉลี่ยเลขคณิตของผลลัพธ์ของการหาค่าแบบคู่ขนานสองครั้งถือเป็นผลการทดสอบขั้นสุดท้าย ความแตกต่างที่อนุญาตระหว่างผลลัพธ์ของการกำหนดแบบขนานไม่ควรเกิน ±0.05%

3.8.2, 3.8.3. (แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.9. การกำหนดปริมาณโซเดียมคลอไรด์

3.9.1. อุปกรณ์ วัสดุ และรีเอเจนต์

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

เครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์

องค์ประกอบความร้อน (เตา, เตา);

ปิเปตตาม GOST 20292-74;

บิวเรตตาม GOST 20292-74;

บีกเกอร์ในห้องปฏิบัติการตาม GOST 25336-82

สารส้มเฟอร์ริกแอมโมเนียมตาม GOST 4205-77 สารละลายอิ่มตัว

โพแทสเซียมไทโอไซยาเนตตาม GOST 4139-75 หรือแอมโมเนียมไทโอไซยาเนตสารละลาย 0.1 N

กรดไนตริกตาม GOST 4461-77 เข้มข้น

ซิลเวอร์ไนเตรตตาม GOST 1277-75, สารละลาย 0.1 N;

น้ำกลั่นตาม GOST 6709-72

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.9.2. ดำเนินการทดสอบ

วางน้ำซุปเปปโตนเนื้อ 2 ซม. ในแก้วเติมน้ำ 20 ซม. กรดไนตริกเข้มข้น 1 ซม. และเติม 0.1 N 10 ซม. สารละลายซิลเวอร์ไนเตรต

ส่วนผสมที่ได้จะถูกให้ความร้อนจนกระทั่งเริ่มเดือดและทำให้เย็นลงอย่างรวดเร็วโดยการจุ่มแก้วลงในภาชนะที่มีน้ำที่อุณหภูมิห้อง หลังจากเย็นลงแล้ว สารละลายเฟอร์ริกแอมโมเนียมสารส้มอิ่มตัว 2 ซม. จะถูกเติมลงในส่วนผสมและไตเตรทด้วยสารละลายโพแทสเซียมไทโอไซยาเนต 0.1 นิวตัน (หรือแอมโมเนียมไทโอไซยาเนต) จนกระทั่งมีสีชมพูอมเหลือง

3.9.3. กำลังประมวลผลผลลัพธ์

ปริมาณโซเดียมคลอไรด์ในน้ำซุปเนื้อเปปโตน () เป็นเปอร์เซ็นต์คำนวณโดยใช้สูตร

โดยที่ปริมาณสารละลายซิลเวอร์ไนเตรต 0.1 N ที่ใส่ในแก้วพร้อมตัวอย่างคือ cm;

- ปัจจัยการแก้ไขไทเทอร์ของสารละลายซิลเวอร์ไนเตรต 0.1 N

- ปริมาณสารละลายโพแทสเซียมไทโอไซยาเนต 0.1 N (หรือแอมโมเนียมไทโอไซยาเนต) ที่ใช้สำหรับไตเตรทตัวอย่างทดสอบ cm;

- ปัจจัยการแก้ไขสำหรับ titer ของสารละลายโพแทสเซียมไทโอไซยาเนต 0.1 N (หรือแอมโมเนียมไทโอไซยาเนต)

0.005844 - ปริมาณโซเดียมคลอไรด์ที่สอดคล้องกับสารละลายซิลเวอร์ไนเตรต 0.1 N 1 ซม.

- ปริมาณน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่นำมาวิเคราะห์ดู

ค่าเฉลี่ยเลขคณิตของผลลัพธ์ของการหาค่าแบบคู่ขนานสองครั้งถือเป็นผลการทดสอบขั้นสุดท้าย ความแตกต่างที่อนุญาตระหว่างผลลัพธ์ของการกำหนดแบบขนานไม่ควรเกิน ±0.01%

3.9.2, 3.9.3. (แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.10. การหาความเข้มข้นของไฮโดรเจนไอออน (pH)

3.10.1. อุปกรณ์และวัสดุ

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

เครื่องวัดค่า pH;

บีกเกอร์ในห้องปฏิบัติการตาม GOST 25336-82

ช่องทางแก้ว

ตัวกรองกระดาษ

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.10.2. ดำเนินการทดสอบ

น้ำซุปเปปโตนเนื้อจะถูกกรองผ่านตัวกรองกระดาษ และค่า pH ในตัวกรองใสจะถูกกำหนดตามคำแนะนำที่มาพร้อมกับเครื่องวัดค่า pH

3.11. ความมุ่งมั่นของความเป็นหมัน

3.11.1. อุปกรณ์ วัสดุ รีเอเจนต์

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

เทอร์โมสตัทพร้อมอุณหภูมิความร้อน 37-38 °C;
ตัวกรองกระดาษ ลงในหลอดทดลอง ปิดด้วยจุกสำลีและฝากระดาษ parchment แล้วฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อเป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิ 1.5 กก.F/ซม.

3.11.3. ดำเนินการทดสอบ

น้ำซุปเนื้อ-เปปโตน (ทั้งซีรีส์) จะถูกเก็บไว้ในเครื่องปฏิกรณ์หรือในขวดเป็นเวลาสามวันที่อุณหภูมิห้อง ตัวอย่างน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อบรรจุขนาด 100 ซม. ในขวดสี่ขวดที่มีความจุ 200 ซม. จากนั้นจึงหว่านน้ำซุปเปปโตนเนื้อลงในหลอดทดลองที่มี MPB, MPA และ MPPB การฉีดวัคซีนจะดำเนินการใน 6-8 หลอดโดยแต่ละสื่อ การฉีดวัคซีนทำได้โดยการเติมน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่ทดสอบแล้ว 0.2 ซม. ลงในแต่ละหลอดทดลอง หลอดทดลองและขวดจะถูกเก็บไว้เป็นเวลาสามวันในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37-38 °C สารในหลอดทดลองและน้ำซุปเปปโตนเนื้อในขวดจะต้องคงสภาพปลอดเชื้อ

3.11.2, 3.11.3. (แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.11.4. กำลังประมวลผลผลลัพธ์

หากมีการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ในเครื่องปฏิกรณ์หรือขวด ชุดน้ำซุปเปปโตนเนื้อจะถูกปฏิเสธ หากมีการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ในขวดและหลอดทดลองทั้งหมด ชุดน้ำซุปเปปโตนเนื้อก็จะถูกปฏิเสธเช่นกัน

หากมีการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ในขวดเดียวหรือในหลอดทดลองหนึ่งหรือสองหลอด การควบคุมภาวะปลอดเชื้อจะถูกทำซ้ำกับจำนวนสองเท่าของจำนวนขวดและหลอดทดลอง หากจุลินทรีย์เจริญเติบโตอีกครั้ง ชุดน้ำซุปเปปโตนเนื้อจะถูกปฏิเสธ

3.12. การกำหนดความสามารถในการรองรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์

3.12.1. อุปกรณ์ วัสดุ และรีเอเจนต์

เพื่อดำเนินการทดสอบการใช้งาน:

เครื่องชั่งทางเทคนิค

เทอร์โมสตัท;

หม้อนึ่งความดัน;

เครื่องวัดค่า pH;

ปิเปตตาม GOST 20292-74;

บิวเรต

3.12.2. การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบ

เตรียมตามสูตรปัจจุบันโดยใช้วุ้นเนื้อ-เปปโตนทดสอบ วุ้นเนื้อเปปโตน โดยเติมวุ้นจุลินทรีย์ 2% ลงในน้ำซุป และตั้งค่า pH ของตัวกลางเป็น 7.4

น้ำซุปเปปโตนเนื้อทดสอบและวุ้นเปปโตนเนื้อที่เตรียมไว้จะถูกเทลงในหลอดทดลองขนาด 8-10 ซม. ปิดด้วยจุกผ้าก๊อซสำลีและฝากระดาษรองอบ และนำไปฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันเป็นเวลา 30 นาทีที่ 1.5 กก./ซม.

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

3.12.3. ดำเนินการทดสอบ

น้ำซุปเปปโตนเนื้อปลอดเชื้อและวุ้นเนื้อเปปโตนได้รับการปลูกฝังด้วยการเพาะเลี้ยงในแต่ละวัน: Staphylococcus aureus "Lassmanov", Esherichia coli, สายพันธุ์ 675, Streptococcus faccalis, สายพันธุ์ 6783 ได้รับจากสถาบันวิจัยแห่งรัฐเพื่อการมาตรฐานและการควบคุมการเตรียมการทางการแพทย์ที่ตั้งชื่อตาม แอล.เอ. ทาราเซวิช. แต่ละวัฒนธรรมได้รับการฉีดวัคซีนโดยใช้ลูปปาสเตอร์เป็นหลอดสามหลอดที่มี MPB และสามหลอดที่มี MPA การฟักตัวจะดำเนินการเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37-38 °C

การเจริญเติบโตของพืชควรเป็นแบบฉบับและอุดมสมบูรณ์

3.12.4. กำลังประมวลผลผลลัพธ์

การเติบโตโดยทั่วไปของวัฒนธรรมในแต่ละวันนั้นถูกกำหนดด้วยสายตาและภายใต้กล้องจุลทรรศน์

ความเข้มของการเจริญเติบโตใน MPA ได้รับการประเมินด้วยสายตาใน MPB - ด้วยสายตาและบนโฟโตอิเล็กทริกคัลเลอริมิเตอร์ที่ความยาวคลื่น 620-640 นาโนเมตรในคิวเวตต์ที่มีความยาวในการทำงาน 5 มม.

4. การบรรจุ การติดฉลาก การขนส่ง และการเก็บรักษา

______________
* ชื่อส่วน. ฉบับแก้ไขเพิ่มเติม สาธุคุณ ยังไม่มีข้อความ 1.

4.1. น้ำซุปเนื้อเปปโตนบรรจุในขวดแก้ว (ถัง) ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยความจุ 10±0.5 และ 20±1 ลิตร อนุญาตให้ใช้บรรจุภัณฑ์ขนาดเล็ก - ขวดที่มีความจุ 200 และ 500 ซม.

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

4.2. ปิดขวดด้วยจุกยางฆ่าเชื้อซึ่งผูกด้วยกระดาษ parchment ที่ด้านบน ปิดขวดด้วยจุกยางแล้วม้วนด้วยฝาอลูมิเนียม

(แก้ไขฉบับแก้ไขครั้งที่ 1)

4.3. ฉลากกระดาษติดอยู่กับขวดและขวดที่ระบุ:

ชื่อของยา

ปริมาณยา l;

หมายเลขชุดยา

วันที่ผลิต

วันหมดอายุ;

สภาพการเก็บรักษา;

สัญลักษณ์ของมาตรฐานนี้

4.4. น้ำซุปเนื้อ-เปปโตนจะถูกเก็บไว้ในเครื่องปฏิกรณ์หรือในขวดในห้องที่สะอาด แห้ง และมืดที่อุณหภูมิ 4-10 °C

4.5. น้ำซุปเนื้อเปปโตนถูกขนส่งโดยวิธีการขนส่งทั้งหมดภายใต้สภาวะการเก็บรักษาที่ระบุไว้ในข้อ 4.4 อนุญาตให้ขนส่งที่อุณหภูมิสูงกว่าได้ แต่ต้องไม่เกิน 18 ° C และระยะเวลาการขนส่งไม่ควรเกินห้าวัน
.

GOST 10394-72 ได้รับการแนะนำเพื่อแทนที่ GOST 10394-63

GOST 10515-75 ได้รับการแนะนำเพื่อแทนที่ GOST 10515-63

GOST 10931-74 ได้รับการแนะนำเพื่อแทนที่ GOST 10931-64

ข้อความเอกสารอิเล็กทรอนิกส์
จัดทำโดย Kodeks JSC และตรวจสอบกับ:
สิ่งพิมพ์อย่างเป็นทางการ
อ.: สำนักพิมพ์มาตรฐาน, 2519

เติมเปปโตน 1% ลงในน้ำซุปเนื้อ 100 มล. เปปโตนเป็นผลิตภัณฑ์จากการไฮโดรไลซิสของโปรตีนด้วยเอนไซม์ เติมเปปโตนในตัวกลางเพื่อเพิ่มคุณค่าทางโภชนาการ หากต้องการอัดตัวกลาง ให้เติมวุ้น-วุ้น 2 ถึง 4% ลงไป

สารอาหารมีเดียม ดี.บี. มีความเป็นกรดเล็กน้อยสัมพันธ์กับไซโตพลาสซึมของจุลินทรีย์ที่จะเติบโตในนั้น ในการทำเช่นนี้ให้เติมเกลือแกง 0.5% ลงในสื่อ ปฏิกิริยาของสิ่งแวดล้อมคือตั้งแต่ 7.0 ถึง 7.4 หลังจากแนะนำวุ้นแล้ว ส่วนผสมจะถูกให้ความร้อนจนกระทั่งเจลาติไนเซชันไม่สมบูรณ์

การเตรียมเนื้อเปปโตนเจลาติน.

สื่อนี้เตรียมคล้ายกับ MPA แต่สำหรับการบดอัดจะใช้กับวุ้นวุ้นและเจลาตินในปริมาณ 10-12% MPA มีข้อดีมากกว่า MPA หลายประการ มันรวมตัวกับแก้วได้ดีกว่า แบคทีเรียที่เน่าเปื่อยจะก่อตัวเป็นโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะมากเมื่อเติบโตบนอาหารนี้ นอกจากนี้ แบคทีเรียที่เน่าเปื่อยบางชนิดยังมีความสามารถในการทำให้เจลาตินเหลวซึ่งมีความสำคัญมากในการกำหนดประเภทของแบคทีเรีย แต่ "MPZ" ละลายที่อุณหภูมิ 30-37 0 C นี่เป็นข้อเสียเปรียบ

ในระหว่างการศึกษาลักษณะทางชีวเคมีของจุลินทรีย์จะใช้สื่อการวินิจฉัยแยกโรค ตัวอย่างของสื่อดังกล่าวคือสื่อ Hiss ใช้เพื่อศึกษาความสามารถของม. หมักคาร์โบไฮเดรต

องค์ประกอบของสื่อ Hiss ประกอบด้วยคาร์โบไฮเดรต 1%, วุ้น 1% และตัวบ่งชี้ ตัวอย่างของสื่อดังกล่าวคือสื่อ Endo ที่ใช้ในการแยก Bact โคไล องค์ประกอบของสื่อนี้รวมถึงสารละลายแอลกอฮอล์อิ่มตัวของฟูซิน, แลคโตส Na 2 SO 3, pH 7-7.2 Bact นอกเหนือจาก MPA โคไลสร้างโคโลนีที่มีความแวววาวของโลหะบนอาหารเอนโด หากต้องการศึกษาเชื้อรา ให้ใช้สื่อของ Sabouraud ที่มีองค์ประกอบดังต่อไปนี้: กลูโคส 1%, เปปโตน 1%, วุ้น-วุ้น 2% pH 5-5.6

ลำดับงาน:

เตรียม MPA 100 มล.:

1. ดื่มน้ำลงในกระทะแล้ววางบนเตาเพื่อเตรียมอ่างน้ำ

2. เท MB 100 มล. ลงในขวด เปปโตนหนัก 2 กรัม วุ้นวุ้น 0.5 กรัม ทั้งหมดนี้ใส่ในขวดพร้อมน้ำซุปเนื้อ

3. วางขวดไว้ในกระทะที่มีน้ำร้อน และเนื้อหาในขวดจะถูกทำให้ร้อนจนกระทั่งวุ้นวุ้นละลายหมดและตัวกลางจะกลายเป็นเนื้อเดียวกัน จากนั้นเติมโซดา (จนกว่าปฏิกิริยาจะมีความเป็นด่างเล็กน้อยถึงสารลิตมัส)

4. เทตัวกลางที่หลอมละลายลงในหลอดทดลองขนาด 10 มล.

5. เตรียมหลอดสำลี คลุมด้วยผ้ากอซ และปิดจุกด้วยสารอาหารที่เตรียมไว้

6. วางหลอดทดลองที่มี MPA ไว้ในตะกร้า พวกเขาจะถูกส่งไปยังผู้ช่วยห้องปฏิบัติการเพื่อทำหมัน

การจำแนกสื่อวัฒนธรรม

ขึ้นอยู่กับองค์ประกอบ สารอาหารแบ่งออกเป็น 2 กลุ่ม: ตัวกลางธรรมชาติที่มีองค์ประกอบไม่แน่นอนและตัวกลางสังเคราะห์

เป็นธรรมชาติมักเรียกว่าสื่อที่ประกอบด้วยผลิตภัณฑ์จากสัตว์หรือพืชที่มีสารเคมีที่ซับซ้อนซึ่งไม่ได้กำหนดไว้ สารประกอบ. พื้นฐานของสภาพแวดล้อมดังกล่าวคือส่วนต่างๆ ของพืชสีเขียวและเนื้อเยื่อของสัตว์ มอลต์ ยีสต์ ผลไม้ ผัก... ส่วนใหญ่ใช้ในรูปแบบของสารสกัดหรือการชง อย่างไรก็ตามสื่อที่มีองค์ประกอบที่ไม่แน่นอนนั้นมีประโยชน์เพียงเล็กน้อยในการศึกษาสรีรวิทยาของการเผาผลาญของจุลินทรีย์เนื่องจากสื่อเหล่านี้ไม่อนุญาตให้คำนึงถึงการบริโภคส่วนประกอบจำนวนหนึ่งของตัวกลางและในทางกลับกันการระบุว่าสารใดที่เป็น เกิดขึ้นระหว่างการพัฒนาของจุลินทรีย์ นี่เป็นเพราะความจริงที่ว่าองค์ประกอบของสารอาหารจากธรรมชาตินั้นซับซ้อนมากและยิ่งกว่านั้นมันไม่คงที่ ตัวกลางธรรมชาติที่มีองค์ประกอบไม่แน่นอนจะใช้เป็นหลักในการคงสภาพการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ การสะสมชีวมวล และเพื่อวัตถุประสงค์ในการวินิจฉัย สื่อที่มีองค์ประกอบไม่แน่นอนยังรวมถึงสิ่งที่เรียกว่าสื่อ "กึ่งสังเคราะห์" อีกด้วย องค์ประกอบของพวกเขาพร้อมกับสารเคมีที่รู้จักกันดี สารประกอบ ได้แก่ สารที่มีองค์ประกอบไม่แน่นอนสื่อดังกล่าวใช้กันอย่างแพร่หลายในอุตสาหกรรม จุลชีววิทยาเพื่อให้ได้กรดอะมิโน วิตามิน และยาปฏิชีวนะ ตามตัวอย่างของสื่อดังกล่าว เราสามารถตั้งชื่อ: อาหารสื่อเปปโตนเนื้อ ซึ่งพร้อมกันกับสารสกัดจากเนื้อสัตว์และเปปโตน ได้แก่ เกลือแกง โจ๊กฟอสเฟต บางครั้งก็มีกลูโคสหรือซูโครส อาหารมันฝรั่งที่มีกลูโคสหรือเปปโตน

สื่อสังเคราะห์- สารเหล่านี้เป็นสื่อที่ประกอบด้วยสารประกอบบริสุทธิ์ทางเคมีบางชนิดเท่านั้น ซึ่งถ่ายในระดับความเข้มข้นที่ระบุอย่างแม่นยำ สื่อสังเคราะห์อาจมีชุดส่วนประกอบที่ค่อนข้างใหญ่ แต่สามารถจัดองค์ประกอบได้ค่อนข้างง่าย สื่อสังเคราะห์มีความสะดวกที่สุดในการศึกษาเมแทบอลิซึมของจุลินทรีย์ เมื่อทราบองค์ประกอบและปริมาณที่แน่นอนของส่วนประกอบต่างๆ ที่รวมอยู่ในสิ่งแวดล้อม จึงสามารถศึกษาการบริโภคและการแปรสภาพเป็นผลิตภัณฑ์เมตาบอลิซึมที่เกี่ยวข้องได้

ตามวัตถุประสงค์: มีสภาพแวดล้อมการวินิจฉัยแบบเลือกและแบบแยกส่วน

สภาพแวดล้อมวิชาเลือกรับประกันการพัฒนา mo.o ประเภทหนึ่งที่โดดเด่น หรือกลุ่มจุลินทรีย์ที่เกี่ยวข้อง (เหมาะสมน้อย หรือไม่เหมาะสมกับการพัฒนาของผู้อื่นเลย) สื่อดังกล่าวใช้เพื่อการแยกเป็นหลัก

จุลินทรีย์จากแหล่งที่อยู่อาศัยตามธรรมชาติเพื่อให้ได้มาซึ่งวัฒนธรรมอันอุดมสมบูรณ์

สภาพแวดล้อมการวินิจฉัยที่แตกต่างกัน: สิ่งเหล่านี้คือสภาพแวดล้อมที่ทำให้สามารถแยกแยะ (แตกต่าง) ประเภทของ mo.o บางประเภทได้อย่างรวดเร็วมาก จากผู้อื่น องค์ประกอบของพวกเขาได้รับการคัดเลือกในลักษณะที่ช่วยให้สามารถระบุคุณสมบัติที่เป็นลักษณะเฉพาะที่สุดของ mo ประเภทนี้ได้อย่างชัดเจน ซึ่งมักทำได้โดยการแนะนำสีย้อมบ่งชี้พิเศษลงในสื่อ

ตามสภาพร่างกายสื่อแบ่งออกเป็นของเหลว หนาแน่น และละเอียด เพื่อชี้แจงลักษณะทางสรีรวิทยาและชีวเคมีของจุลินทรีย์รวมถึงการสะสมชีวมวลหรือผลิตภัณฑ์เมตาบอลิซึม การใช้ตัวกลางของเหลวจะสะดวกที่สุด สื่อแข็งถูกใช้เพื่อแยกวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ ในชีววิทยาอุตสาหกรรม มีการใช้สิ่งที่เรียกว่าสื่อจำนวนมาก ซึ่งรวมถึงลูกเดือยต้มแช่ในสารละลายธาตุอาหาร

คำถามเพื่อการควบคุมตนเอง:

2. จำแนกตามสถานะการรวมกลุ่มอย่างไร?

3. สารอาหารแบ่งตามจุดประสงค์อย่างไร? ในกรณีใดจะสะดวกกว่าในการใช้สภาพแวดล้อมอย่างใดอย่างหนึ่ง?

4. สื่อชนิดใดที่เรียกว่าการวินิจฉัยแยกโรค?

5. เตรียมสื่อวัฒนธรรมอย่างไร? สารก่อเจลชนิดใดที่ใช้บ่อยที่สุด?

6. MPA มีอะไรบ้าง? มีการเตรียมตัวอย่างไร?

7. MPA แตกต่างจาก MW อย่างไร

การบ้าน:

1. จัดทำรายงานบทเรียนห้องปฏิบัติการ

2. เตรียมปกป้องบทเรียนในห้องปฏิบัติการ

งานห้องปฏิบัติการหมายเลข 5

น้ำซุปเนื้อเปปโตน (MPB)ในการเตรียมสื่อเปปโตนเนื้อ ให้ใช้ น้ำซุปเนื้อโดยได้ดังนี้ เนื้อสดสับละเอียด 500 กรัม ไร้กระดูก ไขมัน และเส้นเอ็น เทลงในกระทะเคลือบด้วยน้ำประปา 1 ลิตร ตั้งไฟให้ร้อนถึง 50°C แล้วปล่อยทิ้งไว้ 12 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หรือ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง 50-55°ซ. คั้นเนื้อออกกรองสารสกัด ผ่านผ้ากอซด้วยสำลีชั้นหนึ่งต้ม 30 นาที เพื่อจับตัวเป็นโปรตีนคอลลอยด์และกรองสองครั้ง (ครั้งแรกผ่านผ้ากอซด้วยสำลี, ครั้งที่สองผ่านตัวกรองกระดาษ) เติมน้ำที่กรองแล้วลงในขวดปริมาตร 1 ลิตร ปิดด้วยจุกสำลีและฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 120°C เป็นเวลา 20 นาที (ปิดจุกขวดด้านบนด้วยฝากระดาษ) ปลั๊กสำลีควรจะแน่นเพราะทำหน้าที่เป็นตัวกรองเพื่อป้องกันไม่ให้แบคทีเรียเข้าไปในอากาศหลังการฆ่าเชื้อ

สามารถใช้น้ำซุปเนื้อได้ตลอดเวลาเพื่อเตรียมสื่อที่เหมาะสม หากเตรียมไว้ทันทีก็ไม่จำเป็นต้องฆ่าเชื้อน้ำซุปเนื้อเบื้องต้น

บ่อยครั้งในสภาพห้องปฏิบัติการจะมีการต้มเนื้อสัตว์ร่วมกับเนื้อสัตว์จากนั้นจึงบีบเนื้อออก ส่งผลให้ได้น้ำซุปคุณภาพดี หากคุณต้องการน้ำซุปเนื้อที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูงเป็นพิเศษ ให้เติมเปปซินเล็กน้อยในขณะที่ใส่น้ำลงไปในเนื้อและทำให้น้ำซุปเป็นกรดด้วยกรดไฮโดรคลอริก Pepsin ส่งเสริมการไฮโดรไลซิสของสารประกอบโปรตีนจากเนื้อสัตว์เพิ่มเติม และเป็นผลให้ปริมาณสารอาหารที่มีให้กับแบคทีเรียเพิ่มขึ้น สามารถแทนที่เนื้อสัตว์ด้วยสารสกัดจากเนื้อสัตว์ (5 กรัมต่ออาหาร 1 ลิตร)

ในการเตรียม MPB ให้เติมน้ำซุปเนื้อ 5-10 กรัมลงในน้ำซุปเนื้อ 1 ลิตร เปปโตน(ผลิตภัณฑ์แรกของโปรตีนไฮโดรไลซิส) เพื่อเพิ่มปริมาณแคลอรี่ของตัวกลางและ 5 กรัม เกลือแกงเพื่อสร้างกิจกรรมออสโมติก ตัวกลางถูกให้ความร้อนจนกระทั่งเปปโตนละลายและคนตลอดเวลา

จากนั้นปฏิกิริยาที่เป็นกลางหรือเป็นด่างเล็กน้อยของตัวกลางจะเกิดขึ้นโดยการเติมสารละลาย Na 2 CO 3 20% จนกระทั่งกระดาษลิตมัสสีแดงเปียกเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงิน สะดวกในการใช้ตัวบ่งชี้เพื่อตรวจสอบค่า pH ของตัวกลาง บรอมไทมอลโบลา:ผสม 1-2 หยดในถ้วยพอร์ซเลนพร้อมน้ำซุปหนึ่งหยด ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกลาง โบรโมไทมอล บลูจะมีสีเขียวในขวด ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรดจะมีสีเหลือง และในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่างจะมีสีฟ้า

หลังจากกำหนด pH แล้ว ตัวกลางจะถูกต้มอีกครั้งเป็นเวลา 5-10 นาที และโปรตีนที่แข็งตัวเมื่อปฏิกิริยาของตัวกลางเปลี่ยนแปลงจะถูกกรองผ่านตัวกรองกระดาษโดยไม่ทำให้น้ำซุปใสหรือทำให้น้ำซุปใสด้วยโปรตีน เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ให้ตีไข่ขาวสดกับน้ำปริมาณสองเท่าแล้วผสมกับน้ำซุปที่ทำให้เย็นลงถึง 50 °C ต้มส่วนผสมให้เข้ากันโดยใช้ไฟอ่อนเป็นเวลา 10 นาทีแล้วกรอง เทน้ำซุปเปปโตนเนื้อใสลงในหลอดทดลอง ปิดด้วยสำลีอุด และฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 120 °C เป็นเวลา 20 นาที

เปปโตนวุ้นเนื้อ (MPA)เติมวุ้น 15-20 กรัมลงใน MPB 1 ลิตร ตัวกลางถูกให้ความร้อนจนกระทั่งวุ้นละลาย (จุดหลอมเหลวคือ 100 ° C อุณหภูมิการแข็งตัวของมันคือ 40 ° C) ตัวกลางมีความเป็นด่างเล็กน้อยด้วยสารละลาย Na 2 CO 3 20% และเทผ่านกรวยลงในหลอดทดลอง (ประมาณ วุ้น 10 มล. ในคอลัมน์สำหรับเทในจานเพาะเชื้อในภายหลังและ 5 มล. เพื่อให้ได้วุ้นสันดอน

เมื่อเทวุ้น คุณต้องแน่ใจว่าขอบของหลอดยังคงแห้ง ไม่เช่นนั้นจุกจะติดกับแก้ว หลอดทดลองที่มีตัวกลางจะถูกฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 120 °C เป็นเวลา 20 นาที

เจลาตินเนื้อเปปโตน (MPG)ใน MPB 1 ลิตร เติมเจลาติน 100-150 กรัม จุดหลอมเหลวของเจลาตินขึ้นอยู่กับเนื้อหาในตัวกลาง: ในกรณีที่ความเข้มข้น 10% ในตัวกลางจะละลายที่ 24 ° C; ในกรณี 15% - ที่ 25 °C ในฤดูร้อนสื่อเตรียมโดยเติมเจลาติน 15%

หลังจากการละลายเจลาตินโดยใช้ความร้อนอย่างระมัดระวังให้สร้างปฏิกิริยาอัลคาไลน์เล็กน้อยของตัวกลาง (สำหรับ MPB และ MPA) ต้มเป็นเวลา 5 นาทีจากนั้นทำให้เย็นลงที่ 40-50 ° C วิปไข่ขาวกับน้ำเล็กน้อยเทลงในเจลาตินที่เย็นแล้วเขย่าให้เข้ากันแล้วอุ่นอีกครั้ง หลังจากที่โปรตีนตกตะกอน ตัวกลางจะโปร่งใส กรองด้วยความร้อนผ่านตัวกรองกระดาษ เทลงในหลอดทดลอง และฆ่าเชื้อในหม้อต้ม Koch ด้วยไอน้ำที่ไหล ให้ความร้อนแก่อาหาร 3 ครั้ง เป็นเวลา 30 นาที ทุกๆ 24 ชั่วโมง

วุ้นมันฝรั่งหั่นมันฝรั่งปอกเปลือกและล้างแล้ว 200 กรัมเป็นชิ้น เติมน้ำประปา 1 ลิตร ปรุงเป็นเวลา 30 นาที น้ำซุปจะถูกกรองผ่านสำลีและเติมน้ำลงในปริมาตรเดิม เติมวุ้น 2% ลงในของเหลวที่ได้ ต้มจนละลายและตัวกลางเป็นกลาง (pH = 7) ตัวกลางจะถูกฆ่าเชื้อเป็นเวลา 20 นาทีที่ 1 atm 1

เบียร์สาโทและสาโทวุ้นข้าวบาร์เลย์แช่ในน้ำเย็นและงอกที่อุณหภูมิ 35 °C หลังจากที่ถั่วงอกยาวเป็นสองเท่าของเมล็ดแล้ว เมล็ดหลังจะถูกทำให้แห้งจนแห้งด้วยอากาศ (อาจใช้ความร้อนต่ำ) ได้ มอลต์ในการเตรียมสาโทนั้น ให้บดมอลต์หยาบแล้วผสมกับน้ำ (มอลต์ 250 กรัมต่อน้ำ 1 ลิตร) เพื่อให้แยกเอนไซม์อะไมเลสได้ดีขึ้น ส่วนผสมจะถูกให้ความร้อนที่ 57 ° C จนกระทั่งปฏิกิริยากับแป้งหายไป (สีน้ำเงินกับไอโอดีน) การทดสอบการเปลี่ยนน้ำตาลเป็นแป้งจะดำเนินการในถ้วยพอร์ซเลนในของเหลวหยดหนึ่ง

สาโทถูกกรองผ่านสำลีแล้วกรองผ่านตัวกรองกระดาษ สาโทนี้มีน้ำตาล 10-20% เนื้อหาที่แน่นอนถูกกำหนดโดยความหนาแน่นของสารละลายโดยใช้เครื่องวัดน้ำตาล สาโทจะเจือจางด้วยน้ำให้มีความเข้มข้นของน้ำตาล 6-8% และฆ่าเชื้อเป็นเวลา 30 นาทีที่ 115 °C และความดัน 0.5 atm สามารถหาสาโทสำเร็จรูปได้จากโรงเบียร์

สำหรับประกอบอาหาร วุ้นสาโทเติมวุ้น 2.5-3% ลงในสาโทเบียร์ ต้มจนละลาย กรองผ่านสำลีและฆ่าเชื้อภายใต้เงื่อนไขเดียวกับสาโทเบียร์

นมไขมันต่ำ.ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ จะใช้นมพร่องมันเนยหรือที่เรียกว่านมพร่องมันเนย เนื่องจากไขมันในนมส่งผลเสียต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิด นมพร่องมันเนยได้มาจากการแยกนมที่ให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 34 °C ไขมันสามารถถูกกำจัดออกได้เมื่อนมตกตะกอน

เมื่อฆ่าเชื้อ คุณควรจำไว้ว่านมไม่สามารถเก็บไว้ในหม้อนึ่งความดันเป็นเวลานานได้ เนื่องจากแลคโตส (น้ำตาลในนม) ที่มีอยู่ในนมอาจทำให้เกิดคาราเมลได้

นมพร่องมันเนยเทลงในหลอดทดลองที่ปลอดเชื้อ และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 115 °C (ความดัน 0.5 atm) เป็นเวลา 10 นาที ก่อนการฆ่าเชื้อ ค่าความเป็นกรดของนมพร่องมันเนยไม่ควรเกิน 22° เทิร์นเนอร์ ไม่เช่นนั้นนมจะจับตัวเป็นก้อน หลังจากการฆ่าเชื้อแล้ว ให้เก็บไว้ในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 30°C เป็นเวลา 3 วัน เพื่อกระตุ้นให้เกิดการพัฒนารูปแบบสปอร์และรูปแบบทนความร้อนอื่นๆ หลังจากผ่านไป 3 วัน ให้ตรวจสอบหลอดที่มีนมและทิ้งท่อที่มีการพัฒนาของจุลินทรีย์ออกไป

เมื่อฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน บางครั้งอาจเกิดสีน้ำตาลของนมได้เนื่องจากการคาราเมลของน้ำตาลในนมและเปปโตไนเซชันของเคซีน ในระหว่างการฆ่าเชื้อเป็นเวลานาน เคซีนจะตกตะกอนที่ด้านล่างของหลอดซึ่งสามารถเปปโตไนซ์ได้บางส่วน นมสีน้ำตาลที่ร้อนเกินไปไม่สามารถใช้เป็นสื่อได้

สื่อยีสต์ น้ำยีสต์ยีสต์แห้ง 50-100 กรัมเจือจางในน้ำ 1 ลิตรต้มเป็นเวลา 10 นาทีกรองผ่านตัวกรองกระดาษและฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำที่ไหลเป็นเวลา 30 นาทีทุกวันเป็นเวลา 3 วัน

ยีสต์จะละลายอัตโนมัติยีสต์กด 200 กรัมเจือจางในน้ำ 1 ลิตร เพิ่ม Na 2 HPO 4 2 กรัมหยด I N สารละลาย NaOH (ถึง pH 6.1) และคลอโรฟอร์ม 5 มล. เก็บไว้ที่ 37 °C เป็นเวลา 2 วัน ปรับด้วยสารละลาย NaOH เป็น pH 7.4 ต้มเป็นเวลา 30 นาที กรองผ่านกระดาษกรองเทใส่จานและฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 115 ° กับ 30 นาที

สารสกัดจากยีสต์ยีสต์กด 1 กิโลกรัมเจือจางในน้ำ 1 ลิตร ต้มส่วนผสมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกรองสามครั้งผ่านตัวกรองกระดาษและฆ่าเชื้อที่ 115 ° C เป็นเวลา 30 นาที

น้ำซุปถั่วเทถั่ว 50 กรัม (ควรเป็นสีขาว) ลงในน้ำประปา 1 ลิตรแล้วปรุงจนสุกเพื่อไม่ให้ถั่วสุกเกินไป น้ำซุปที่ได้จะถูกกรองผ่านสำลีเติมน้ำตาล 10 กรัมลงไปแล้วนำไปที่ปริมาตรเดิม ตัวกลางมีความเป็นด่างเล็กน้อย เทลงในขวดและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันเป็นเวลา 30 นาทีที่แรงดันไอน้ำ 1.5 atm

1 ตามระบบ SI ความดันมักจะแสดงเป็น ปาสคาล(Pa): 1 เอทีเอ็ม = 1.01325 x 10 5 Pa = 0.1 MPa